发酵工业与发酵工程_09动植物细胞大规模培养技术重点.ppt

分批补料式培养 在细胞培养的过程中随着营养物质的消耗，不断地向系统中补充新的营养物质，是近年来动物细胞大规模培养技术研究的热点。 ? 半连续式培养是在分批式培养的基础上，将分批培养的培养液部分取出，并重新补充加入等量的新鲜培养基，从而使反应器内培养液的总体积保持不变的培养方式。 半连续式培养 ? 动物细胞的灌注培养即是把细胞接种后进行培养，一方面连续往反应器中加入新鲜的培养基，同时又连续不断地取出等量的培养液，但是过程中不取出细胞，细胞仍留在反应器内，使细胞处于一种营养不断的状态。 灌注培养 细胞可维持在较小体积培养液中生长； 细胞损伤程度低； 易于更换培养液； 细胞和培养液易于分离； 培养液中产物浓度高，简化了产品分离纯化操作。 固定化培养优点 ? 动物细胞生长缓慢，又具有锚地依赖性，培养时为防止污染，除反应器密封性能良好外，尚需添加抗生素，培养过程还要求培养器、管道及接头处所用材质不可释放出对细胞有毒害的物质。 三、培养条件控制 ? 在分批培养时，随着细胞生长，营养消耗，必然产生乳酸等代谢物的积累，引起细胞衰退死亡，需更换培养液或移植继代培养。 ? 动物细胞培养过程亦应控制一定的环境条件，如培养温度、溶解氧、pH、罐压及搅拌速度等。 ? 动物细胞对环境变化适应能力较微生物细胞小得多，故条件控制精密度要求更高。其中特别重要的是溶解氧和pH的控制。 ? 细胞密度低，细胞生产率低，产物浓度也很低。 ? 细胞群体在大规模、长时间培养过程中分泌产物力的丢失或产物活性的降低依然是细胞培养领域深感棘手的问题。 ? 动物细胞培养基，培养设备以及培养用微载体颇为昂贵，限制了细胞培养工程在发展中国家的开展。 四、动物细胞培养存在的问题 开发能高密度生长、能分泌大量目标产品的细胞系。 开发细胞生长性能优良、解离细胞容易，并能重复使用的新型廉价微载体。 研制更大规模的高无菌条件的生物反应器和剪切力小、混合性能良好的新型搅拌系统。 传感器、自动控制技术的应用。 开发新型无血清培养基。 五、动物细胞培养发展的方向 在人工控制下高密度大量培养有益植物细胞技术称之为植物细胞大规模培养，其目的在于通过细胞工业规模培养，获得细胞、初级及次级代谢产物，为药品、食品及化工行业提供服务。 第二节 植物细胞培养技术 ? 选择培养基的基本原则： 需要根据不同培养对象、培养目的及培养条件探索适宜培养基。 选择的培养基在培养过程使细胞总体积倍增时间1天左右为宜。 一、培养基 ? 悬浮培养法 – 分批培养法 – 半连续培养法 – 连续培养法 ? 固定化培养法 二、培养方式 主要采用气升式反应器，其培养过程用通气代替搅拌，细胞产量高于平叶轮培养器。 本培养方法中植物细胞生长规律与微生物相似，随着细胞增长，培养液营养物质不断下降。 细胞增长过程也分为延迟期、对数生长期、转换期、静止期及衰减期等阶段。 1. 分批培养法 * * 第九章 动植物细胞大规模培养技术原理 一、动物细胞形态 1. 成纤维细胞型 ? 细胞体呈梭形或不规则三角形，中央有圆形核，胞质向外伸出2～3个长短不同的突起。 细胞群常借原生质突连接成网，生长时呈放射状、漩涡或火焰状走行。 成纤维细胞型 第一节 动物细胞培养技术 2. 上皮细胞型 这种细胞呈扁平的不规则三角形，中央有圆形核，生长时常彼此紧密连接单层细胞片，起源于外胚层和内胚层组织的细胞，如皮肤表皮及衍生物(汗腺、皮脂腺等)。 上皮细胞型 3. 游走细胞型 这种细胞的培养需要在支持物上生长，一般不连接成片，细胞胞质经常出现伪足或突起，呈活跃的游走和变形运动，速度快而且方向不规则。 游走细胞型 4. 多形性细胞型 除上述三种细胞外，还有一些组织和细胞，如神经组织的细胞等，难以确定它们的稳定形态，可统归多形性细胞。 多形性细胞型 二、动物细胞培养基组成及制备 ? 天然培养基 ? 合成培养基 1、培养基的组成 ? 动物血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，血清含有丰富的营养物质，包括大分子蛋白质和核酸等，对动物细胞的生长繁殖具有促进作用。同时，血清对细胞贴壁和保护亦有明显作用，且能中和有毒物质的毒性，使细胞不受伤害。 天然培养基 ? 根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成的，具有一定的组成。 ? 优点：它给细胞提供了一个近似体内生存环境，又便于控制和标准化的体外生存环境。 合成培养基 – 氨基酸 – 维生素 – 碳水化合物 – 无机盐 –促生长因子及激素 – 血清 合成培养基 ? 合成培养基的种类虽多，但一般都含有: 必需氨基酸是动物细胞本身不能合成的，因此，在制备培养基时需加入必需氨基酸。 有时也加入其他非必需氨基酸。 氨基酸 ? 碳水化合物是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核