专题1基因工程复习知识点和练习..doc

选修3现代生物科技专题 专题1基因工程知识点背诵 1．1 DNA重组技术的基本工具 一、概念：基因工程又叫做DNA重组技术，就是按照人类的要求，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后导入另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 二、基因操作的工具：基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工，即对DNA分子进行剪切和拼接，其主要工具有： 1．分子手术刀：限制性内切酶，简称限制酶。这种酶主要存在于原核生物中，由于每种限制酶能识别特定的核苷酸序列，因此，限制酶能在特定的切点上切割DNA分子。 特点：A、专一性：每一种限制酶只能识别双链DNA分子一种特定的核苷酸序列。 B、切点：各种酶切点不同，即具有特定的酶切位点。 作用：在特定的切点上切割DNA分子形成两个完全相同的黏性末端。 种类：有4000多种限制酶，切割成的DNA末端可分为两大类：黏性末端和平末端(中轴线切口为AT，CG) 2．分子缝合针：其实质是一种DNA连接酶。 作用：是把两个黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。（实质是“缝合”磷酸二酯键 ） 酶的分类： A、Ｅ．coli DNA连接酶(从大肠杆菌中分离得到，只能对互补链的黏性末端起作用) B、T4 DNA连接酶 （对两种末端都起作用） DNA连接酶与DNA聚合酶的异同： （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来因此DNA连接酶不需要模板。 二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 （1）从基因文库中获取目的基因 A、基因文库概念：将含有某种生物不同基因的多个DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称基因文库。 概念理解（实质是：一细菌群体中含有这种生物的不同基因） B、基因文库分类: 基因组文库：含有一种生物全部基因（理解：相当国家图书馆） cDNA文库(部分基因文库)：只含有一种生物部分基因（理解：某市图书馆 ） （2）利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术是聚合酶链式反应的缩写，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术。实施PCR技术的条件：①一段已知的目的基因的核苷酸序列②引物③热稳定DNA聚合酶④原料（脱氧核淦酸核苷酸）⑤能量（ATP）。 实施PCR技术的过程可以在PCR扩增仪中自动完成。 二、基因表达载体的构建（目的基因与运载体结合），是基因工程的核心步骤 基因表达载体的组成：表达载体=启动子+目的基因+终止子+标记基因 表达载体的功能: 使目的基因在受体细胞中存在，并且遗传给下一代，使目的基因表达和发挥作用 启动子：是特殊的ＤＮＡ片段位于基因的首端，它是ＲＮＡ聚合酶的识别和结合部位，用于启动转录产生mＲＮＡ。 终止子（相当红色信号灯）：位于基因的末端用于终止转录过程。 标记基因：鉴别受体细胞是否已含有目的基因。 基因表达载体的构建的步骤： 用同一种限制酶去切割质粒和目的基因，露出 ，加入DNA连接酶，形成重组DNA分子。 三、将含目的基因的表达载体（重组DNA分子）导入受体细胞 1、将含目的基因的导入植物体细胞 （1）农杆菌转化法 转化的概念：目的基因进入受体细胞内，在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 农杆菌转化法的原理： 农杆菌易感染双子叶和裸子植物，农杆菌 的Ti质粒的上的T—DNA可转至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 理解：目的基因搭“顺风车”是借细菌或病毒侵染细胞的过程来进行（P12图1-11）。 （2）其它方法：基因枪法、花粉管通道法。 2、将含目的基因的表达载体导入动物体细胞方法：显微注射技术。基本步骤：P13 3、将含目的基因表达载体导入微生物体细胞，如，导入大肠杆菌细胞的基本步骤： Ca２+处理→细菌细胞壁通透性增加→感受态细胞　　　 重组表达载体DNA溶于缓冲液中与感受态细胞混合→吸收ＤＮＡ 四、目的基因的检测和鉴定（是检测目的基因是否成功导入的关健步骤） (1)检测的意义：鉴别目的基因是否真正导入受体细胞。 (2)检测方法： DNA分子杂交技术和抗原-抗体杂交技术 核酸分子杂交（即DNA探针法）是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单链的DNA小片段用放射性同位素、荧光分子等进行标记（即基因探针），之后同被检测的基因组DNA（或mRNA）杂交，如果显示杂交带，就表明目的基因已插入染色体DNA（或表明目的基因已转录出了mRNA）