南京工业大学酶工程期末考试复习要点重点.docxVIP

2016年酶工程复习要点（老师给）酶工程的发展历史；氨基酰化酶、青霉素酰化酶、葡萄糖异构酶、天冬氨酸酶等酶的应用；常见酶如蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、糖苷酶和果胶酶等的作用机理；酶的三大催化特性；氨基酰化酶：催化DL-氨基酸生产L-氨基酸。青霉素酰化酶：青霉素酰化酶，又称为青霉素酰胺酶或青霉素氨基水解酶。该酶已大规模应用于工业生产β- 内酰胺类抗生素的关键中间体和半合成β- 内酰胺类抗生素。葡萄糖异构酶：用于淀粉酶生产，进行葡萄糖异构化反应。生产果葡糖浆，以代替蔗糖。天冬氨酸酶：催化富马酸和氨生成天冬氨酸。蛋白酶:将蛋白质多肽链从中间切断或从两端逐一水解，生成氨基酸。脂肪酶:水解酶类，能够逐步的将甘油三酯水解成甘油和脂肪酸。纤维素酶：复合酶，降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称。糖苷酶：又称糖苷水解酶，是所有可水解糖苷键的酶类的总称。果胶酶：是指分解植物主要成分—果胶质的酶类。酶的三大催化特性:专一性强、催化效率高、作用条件温和。酶生物合成的调节机理（主要是原核生物）：转录水平调节，操纵子概念；分解代谢（葡萄糖效应原理）、诱导阻遏（诱导物的种类）、代谢产物阻遏；原核生物中酶合成的调节主要是转录水平的调节，主要有三种模式，即分解代谢物阻遏作用，酶合成的诱导作用和酶合成的反馈阻遏作用。操纵子（operon）是一组功能上相关，受同一调控区控制的基因组成的一个遗传单位。分解代谢物阻遏作用（葡萄糖效应）：当葡萄糖作碳源时，葡萄糖的降解物对腺苷酸环化酶有抑制作用，cAMP的浓度降低，导致CAP-cAMP复合物减少，启动基因的相应位点没有足够的CAP-cAMP复合物结合，RNA聚合酶无法结合启动基因的相应位点，转录无法进行，酶的生物合成受到阻碍。酶合成的诱导作用是加入某些物质使酶的生物合成开始或加速的现象。诱导物促进酶编码基因的表达，一般是酶催化作用的底物或底物类似物，也可以是酶催化反应的产物。酶合成的反馈阻遏作用又称为产物阻遏作用，指酶催化反应的产物或代谢途径的末端产物使该酶的生物合成受到阻遏的现象。提高微生物发酵酶产量的措施（三种方法及其原理）；并结合酶生成动力学进行分析；对同步合成、滞后合成、中间合成等现象的分析及解决手段；提高酶产量的措施有添加诱导物、控制阻遏物浓度、添加表面活性剂和添加产酶促进剂。添加诱导物的原理：诱导酶的发酵生产，在发酵过程中的某个适宜的时机，添加适宜的诱导物，可以显著提高酶的产量。控制阻遏物浓度的原理：有些酶的生物合成受到某些阻遏物的阻遏的作用，结果导致该酶的合成受阻或者产量降低。为了提高酶产量，必须设法解除阻遏物引起的阻遏作用。阻遏作用根据机理不同，可分为产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。产物阻遏作用是由酶催化作用的产物或者代谢途径的末端产物引起的阻遏作用。分解代谢物阻遏作用是由分解代谢物（葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物质经过分解代谢而产生的物质）引起的阻遏作用。控制阻遏物的浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施。添加表面活性剂的原理：表面活性剂可以与细胞膜相互作用，增加细胞的透过性，有利于胞外酶的分泌，从而提高酶的产量。非离子型表面活性剂（吐温（Tween）、特里顿(Triton)）。离子型表面活性剂对细胞有毒害作用。添加产酶促进剂的原理：产酶促进剂是指可以促进产酶、但是作用机理未阐明清楚的物质。要通过试验确定所添加的产酶促进剂的种类和浓度。酶的生物合成的模式：比较细胞生长和产酶的关系，可以把酶的生物合成的模式分为同步合成型、延续合成型、中期合成型和滞后合成型四种。同步合成型：酶的生物合成与细胞生长同步进行的一种酶生物合成模式，又称为生长偶联型。该类型可以由诱导物诱导生成，一般不受任何阻遏作用。延续合成型：酶的生物合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶的合成还可以延续一段较长时间。该类型可以是组成酶或诱导酶，一般不受产物的阻遏作用。mRNA相当稳定，受到分解代谢物阻遏时，转为滞后合成型。中期合成型：该类型的酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶的生物合成也随着停止。一般受到产物的反馈阻遏或分解代谢物阻遏。滞后合成型：此类型酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累，又称为非生长偶联型。受到培养基中存在的阻遏物的阻遏作用。只有随着细胞的生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶开始大量合成。优化酶合成模式的思路：酶的mRNA的稳定性以及培养基中阻遏物的存在是影响酶生物合成模式的主要因素。最理想的合成模式应是延续合成型。可以通过基因工程\细胞工程等先进技术,选育得到优良的菌株, 并通过工艺条件的优化控制, 使他们的生物合成模式更加接近于延续合成型。同步合成型：要尽量提高其mRNA的稳定性，为此可以适当降低发酵温度。中期合成型：则要在提高mRNA的稳定性以及