第三章 第三节 酶的化学修饰课件.pptVIP

4、肽链的有限水解 酶原的激活，就是一种肽链的有限水解，即肽链的水解在限定的肽键上进行，酶分子的活性中心没有受到损伤，只是激活了酶的活性或降低了酶分子的抗原性。 5、氨基酸置换修饰 氨基酸置换修饰 将肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸，引起酶蛋白空间构象的改变，从而改变酶的某些特性和功能的方法。 通过两个途径实现： 化学修饰法：由于可用试剂的限制，获得的种类少； 蛋白质工程：利用基因操纵技术。 6、金属离子置换修饰 改变酶分子中所含的金属离子，使酶的特性和功能发生改变的方法。 六、酶经修饰后的性质变化 提高了酶稳定性，改善反应条件及延长使用寿命，改变了最适pH、Km、抑制常数、减少或消除了抗原性，甚至使酶分子具备对某些组织和细胞的亲和力和穿透性。 1、酶稳定性 2、抗原性 3、对各类失活因子的抵抗力 4、半衰期及酶活残留率 5、pH 6、Km 七、酶化学修饰的应用 1、酶结构与功能的研究（小分子对酶侧链基团的化学修饰） 1)、非专一性化学修饰 用非专一性的修饰试剂与氨基酸侧链基团作用： A、若酶活性不变——该基团可能不是酶的必需基团 B、若酶活性降低或丧失——该基团可能是酶的必需基团，但不能确定化学试剂是同活性中心内的必需基团结合。 2）、专一性化学修饰 Y Y Y X-Y Y Y X 位点专一性修饰：底物类似物 活性中心基团的鉴定标准 ①失活程度与修饰剂浓度成一定比例关系。 ②S或可逆抑制剂有保护作用（活性中心）： 先加S或竞Ⅰ 加共价修饰剂 透析除去S或竞Ⅰ 活性不丧失 ③差别标记： 底物或抑制剂存在 活性基团不与修饰剂作用 去除底物或抑制剂 原来被保护的基团带同位素标记 化学修饰 含同位素标记的同样试剂 2、医药（大分子对酶分子表面的化学修饰） 优点：PEG分子与酶蛋白连接后可以在蛋白质表面形成保护层，同时由于PEG分子特有的柔性和线性，能够很好地掩盖蛋白质的抗原决定族，从而延长修饰酶在体内的作用时间和药效，改变组织分布。此外白蛋白，肝素和右旋糖苷等均具有很好的生物相容性。可消除酶的抗原性和避免被机体内其他蛋白酶水解破坏。（前面已作介绍） 如：PEG-腺苷脱氨酶、PEG-超氧化物歧化、PEG-溶血类蛋白、PEG-天门冬酰氨酶、  缺点： 扩散速度受限； 生物活性降低； 选择性不高，稳定性不够理想。 * * * * 第三节 酶的化学修饰 一、酶化学修饰的定义 通过化学方法对酶分子施行的各种改造和修饰，以改变酶理化性质及生物活性的方法。 二、酶化学修饰的目的 1. 研究酶的结构与功能的关系。（50年代末） 2. 人为改变天然酶的某些性质，扩大酶的应用 范围。（70年代末之后） 1）增强酶天然构象的稳定性与耐热性 2）保护酶活性部位与抗抑制剂 3）维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶 4）消除酶的抗原性及稳定酶的微环境 1）、如何增强酶天然构象的稳定性与耐热性 修饰剂分子存在多个反应基团，可与酶形成多点交联。使酶的天然构象产生“刚性”结构。 2）、如何保护酶活性部位与抗抑制剂 大分子修饰剂与酶结合后，产生的空间障碍或静电斥力阻挡抑制剂，“遮盖”了酶的活性部位。 3）、如何维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶 酶化学修饰后通过两种途径抗蛋白水解酶： A. 大分子修饰剂产生空间障碍阻挡蛋白水解酶接近酶分子。“遮盖”酶分子上敏感键免遭破坏。 B. 酶分子上许多敏感基团交联上修饰剂后，减少了受蛋白水解酶破坏的可能性。 4）、如何消除酶的抗原性及稳定酶的微环境 A. 酶蛋白氨基酸组成的抗原决定簇，与修饰剂形成了共价键。 破坏了抗原决定簇——抗原性降低乃至消除 “遮盖”了抗原决定簇——阻碍抗原、抗体结合 B. 大分子修饰剂本身是多聚电荷体，能在酶分子表面形成“缓冲外壳”，抵御外界环境的极性变化，维持酶活性部位微环境相对稳定。 三、原理 利用化学修饰剂所具有的各种基团的特性，直接或间接地经过一定的活化过程与酶分子的某种氨基酸残基发生化学反应，从而对酶分子的结构进行改造。 四、修饰的一般程序 修饰反应 酸化 稀释 阳离子交换 洗涤 过滤 干燥 五、化学修饰方法 1、侧链基团的化学修饰 定义：通过选择性的试剂与