第十章 微生物细胞破碎原理与技术课件.pptVIP

定义: 细胞破碎就是采用一定的方法，在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜，设法使胞内产物最大程度地释放到液相中，破碎后的细胞浆液经固液分离除去细胞碎片后，再采用不同的分离手段进一步纯化. 细胞破碎机理图 四、选择破碎方法的依据 1、细胞的处理量 2、细胞壁的强度和结构 3、目标产物对破碎条件的敏感性 4、 破碎程度 适宜的操作条件应从高的产物释放率，低的能耗和便于后步提取这二方面进行权衡 五、破碎技术研究的方向 1、多种破碎法的结合 化学法与机械法结合；酶法与机械法结合 如用溶解酶预处理面包酵母，然后高压匀浆，95MPa压力下匀浆4次，总破碎率接近100%。而单独采用高压匀浆法，同样条件下破碎率只有32%。 * 第十章 微生物细胞破碎原理与技术 为了研究细胞的破碎，提高其破碎率，有必要了解各种微生物细胞壁的组成和结构 多聚糖 （80-90%） 脂类 蛋白质 葡聚糖 （30-40%） 甘露聚糖 （30%） 蛋白质 （6-8%） 脂类 （8.5-13.5%） 肽聚糖 （5-10%） 脂蛋白 脂多糖 （11-22%） 磷脂 蛋白质 肽聚糖 （40-90%） 多糖 胞壁酸 蛋白质 脂多糖 （1-4%） 主要组成 多层 多层 多层 单层 层次 100-250 100-300 10-13 20-80 壁厚/nm 霉菌 酵母菌 革兰氏阴性细菌 革兰氏阳性细菌 微生物 一、细胞壁的组成和结构 细菌破碎的主要阻力来自于肽聚糖的网状结构，网状结构越致密，破碎的难度越大，革兰氏阴性细菌网状结构不及革兰氏阳性细菌的坚固； 酵母细胞壁破碎的阻力也主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度； 由于霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高。 为了破碎细胞，必须克服的主要阻力是网状结构的共价键。各种微生物的细胞壁的结构和组成差异很大，壁结构不仅取决于遗传信息，也取决于生长的环境，真菌的壁结构还随发酵罐中混合的机械作用而变化。 在用酶法或化学法来溶解细胞壁时，细胞壁的结构和组成显得特别重要，可用来作为选择溶菌酶和化学方法的依据。 条件变化剧烈，易引起大分子物质失活 改变细胞膜渗透性 干燥法 破碎率较低，不适合对冷冻敏感目的产物 反复冻结-融化 冻结融化法 破碎率较低，常与其他方法结合使用 渗透压剧烈改变 渗透压法 具一定选择性，浆液易分离，但释放率较低，通用性差 改变细胞膜的渗透性 化学渗透法 具有高度专一性，条件温和，浆液易分离，溶酶价格高，通用性差 酶分解作用 酶溶法 非 机 械 法 破碎率高，活性保留率高，对冷冻敏感目的产物不适合 固体剪切作用 X-press法 对酵母菌效果较差，破碎过程升温剧烈，不适合大规模操作 液体剪切作用 超声破碎法 可达较高破碎率，可大规模操作，不适合丝状菌和革兰氏阳性菌 液体剪切作用 高压匀浆法 可达较高破碎率，可较大规模操作，大分子目的产物易失活，浆液分离困难 固体剪切作用 珠磨法 机 械 法 适 应 性 作 用 机 理 分 类 二、微生物细胞的破碎技术 ＝＝＝＝基本说出 1、机械方法 为了粉碎微生物细胞，常常选择机械的方法，因为它们的处理量大，破碎速度较快。采用这些方法，细胞受到由高压产生的高剪切力，但在大多数情况下要采取冷却措施，以便除去由于消耗机械能而产生的过多热量，防止生化物质破坏。 （1）珠磨机 研磨是常用的一种方法，它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨，使达到细胞的某种程度破碎。 高速组织捣碎机和Braun匀浆器是实验室规模的细胞破碎设备，利用玻璃小珠撞击微生物细胞而达到破碎的目的。 这些装置的主要缺点是在破碎期间样品温度迅速升高，通过用二氧化碳来冷却容器可得到部分解决。 在工业规模的破碎中，可以采用高速珠磨机。在这种设备中，由于圆盘的高速旋转，使细胞悬浮液和玻璃珠相互搅动，细胞的破碎是由剪切力层之间的碰撞和磨料的滚动而引起的。 （2）高压匀浆器 采用高压匀浆器是大规模破碎细胞的常用方法。利用高压迫使细胞悬浮液通过针形阀，由于突然减压和高速冲击撞击环造成细胞破裂。 在工业规模的细胞破碎中，对于酵母菌等难破碎的及浓度高或处于生长静止期的细胞，常采用多次循环的操作方法。 （3）X－press法 另一种改进的高压方法是将浓缩的菌体悬浮液冷却至－25℃至－30℃形成冰晶体，利用500MPa以上的高压冲击，冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。细胞破碎是由于冰晶体的磨损，包埋在冰中的微生物的变形所引起的。此法称为X－press法，主要用于实验室中。 该法的优点是适用的范围广，破碎率高，细胞碎片的粉碎程度低