双扩凝集反应重点.ppt

沉淀反应与凝集反应 原理 用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶性抗原、抗体在其中能自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应，则在两者比例适当处形成白色沉淀线。 主要材料 器材：载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、 试剂：PBS、琼脂粉、 Ag（正常小鼠IgG）、 Ab（兔抗小鼠IgG血清）  步骤 配制1%琼脂-制板-打孔 稀释抗体：取4支EP管，将抗体倍比稀释 加样：1~5:抗体，中间孔抗原(10μL) 琼脂板放入湿盒内，置4℃，24-48小时后观察结果。 应用: 测定抗体的效价(稀释倍数倒数) 用特异性抗体检测抗原 检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度，比较抗原之间的异同点 原理 颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集块。 基本类型 直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。 主要材料 器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、 灭菌枪头、玻片、一次性采血针 试剂 抗A试剂（蓝色）、抗B试剂（黄色） 1．取洁净载玻片1块，并标记（如图） 2．将抗A、B抗体分别加1滴于玻片两侧。 3．毛细血管采血法: 酒精棉消毒被检者无名指手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。 4.加样: 加样枪取适量（50ul）血液加入抗A抗体(兰色)和抗B抗体(黄色)中并混匀。 5．结果观察: 边混匀边观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。 结果判断 LOGO * LOGO 能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与之特异性结合的物质 B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异性结合抗原的一组糖蛋白。 抗原（antigen, Ag）: 抗体(antibody, Ab) ： 　抗原-抗体反应的特点与影响因素 反应条件：自身因素: 环境因素: 适宜温度 电解质 酸碱度 特点： 特异性 可逆性 最适比例 凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。 沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。 补体参与的反应 免疫标记技术（immunolabelling technique）:用示踪物质标记抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。 抗原-抗体反应的基本检测方法 沉淀反应 ——双向免疫扩散试验 鼠IgG(Ag) 兔抗小鼠IgG(Ab) 免疫 Ag 1 2 3 4 5 control 6 Fig. 2 加样法 50ul1/1Ab 50ul1/2Ab 50ulPBS 50ulPBS 50ulPBS 50ul1/4Ab 50ul1/8Ab 1/2 1/4 1/8 1/16 首先加入 首先加入 首先加入 首先加入 50ulPBS Fig. 1 倍比稀释法 1/4 1/1 PBS 结果判断 A B A B 凝集反应 ——ABO血型鉴定 直接凝集实验（ABO血型鉴定） 间接凝集实验 将可溶性抗原连接于颗粒性载体，与抗体反应成凝集现象 间接凝集抑制实验 待检可溶性抗原与抗体结合后，抑制了连接载体的抗原与抗体形成凝集现象。 抗A、抗B —、— O型 —、— A、B AB型 抗A B B型 抗B A A型 血清中Ab 红细胞表面Ag ABO血型的划分 实验步骤　 A B 抗A 抗B 50ul全血 50ul全血 LOGO