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一、原核生物的基因重组 原核生物的遗传物质传递方式有4种： 转化 转导 接合 溶源性转变 1、转化（transformation） 受体菌吸收来自供体菌的DNA片段，通过交换组合把它整合到自己的基因组中去，前者获得后者的某些遗传性状。 1944年肺炎双球菌转化实验 转化机制： 人工抽提外源的DNA片段 传递时不需要载体 利用改变细胞膜的通透性吸收DNA 同源重组整合，改变受体细胞的基因型。 同源重组： 转化特点： 大部分种类细菌都可以通过转化而重组。 受体细胞吸附双链的DNA，但是，转化时只有一条链进入受体细胞 质粒转化频率最高 感受态细胞：增加细胞吸收外源DNA的效率 转化感受态细胞： 化学方法：CaCl2 电击法： 2、转导（transduction） 以噬菌体为媒介，把一个菌株的遗传物质导入另一个菌株，并使这个菌株获得另一个菌株的遗传性状。 “U型管实验”证明 普遍性转导和特异性转导两种 两个亲本放在U形管的两臂中，结果也能同样获得重组子， 推论以上的杂交并不需要细胞的直接接触，P22 噬菌体 普遍性转导： 转导型噬菌体能传递供体菌的任何基因 转导频率：10-8~10-5 转导机制：供体染色体DNA偶然错误地被包进噬菌体外壳（“偷渡” ）形成转导颗粒。部分二倍体、重组 完全转导和流产转导两大类（转导子稳定性） 流产转导： 在普遍性转导中，有时转导来的供体DNA不一定都能整和到受体染色体上，更多的是不能整合，也不能复制，但有表达。单线传递 流产转导往往多于完全转导的细胞 特异性转导： 噬菌体只能转导供体染色体上某些特定基因。 转导频率：10-6 温和型噬菌体（λ） 转导过程（1）---溶源化产生 当λ噬菌体侵入大肠杆菌K12后，使其溶源化， λ原噬菌体的核酸被整合到大肠杆菌DNA特定位置上，即gal基因和bio基因附近。 转导过程（2）---开始产生裂解 λd gal是指带有gal基因的缺陷型λ，其尾部基因J丢失，不能复制； λdbio，表示带有宿主的bio基因的缺陷型λ ，而丢失了反终止蛋白基因N，故不能形成噬菌斑。 转导过程（3） --- λd gal导入gal-受体菌 A：形成稳定的、非溶源性的转导子，约占1/3 通过携带的gal＋和受体的基因gal－ 进行同源配对，经双交换，产生重组的转导子，这种转导子较为稳定。 由于λd gal多不能复制，经诱导使细胞裂解后，只能释放出1个λd gal去感染受体，转导的频率较低（小于10－6），故称为低频转导（low-frequency transduction, LFT）。 B：形成不稳定的转导子，约占2/3 不稳定，可因λ的切离或丢失而又回复成gal－品系。 高频转导（HFT） 通过λd gal和已整合的正常λ 之间通过单交换进行同源重组所组成双重溶源菌。该菌染色体上含有一个正常的λ，可提供给λd gal复制所需的一切物质，因而λ和λd gal大量同步复制，直至细胞裂解释放出来，λ感染敏感性细菌， λd gal 可感染E.coli gal－受体，进行转导。由于一个细胞能释放出多个λd gal ，所以转导频率较高，故称为高频转导（High-feequency transduction, HFT）。 双重溶源菌 3、接合（conjugation） 通过供体菌和受体菌的直接接触传递遗传物质，也称杂交。 大肠杆菌的接合（接合管） F因子 大肠杆菌F因子 F 因子是一种质粒（plasmid），由共价环状闭合DNA双链构成，全长94.5 Kb，主要分为三个区域：①重组区；②自主复制区；③ 转移区。 根据细胞中是否存在F质粒以及F质粒存在状态，大肠杆菌的菌株被分成四种类型： ① F－型：细胞内不含F质粒； ② F＋型：细胞内含有F质粒； ③ Hfr型：F质粒整合在染色体上的细胞； ④ F′型：含带有宿主基因的接合质粒的细胞。 ① F+×F- 结果：产生2个F+ 滚环复制模型 供体基因的传递稀少 ② F’×F- 结果：产生2个F’ 过程同① ③ Hfr ×F- 结果： F-仍旧是F-，只有极少数情况下，受体成为Hfr，很少成为F+ 供体菌基因的高频重组 中断杂交实验： 将Hfr×F－杂交，在混合后不同时间搅拌，以使接合管断裂，中止染色体向受体细胞转移。越是排在前面的基因进入受体的机会越高，反之排在离起点较后的基因进入受体的机会越低，因此用不同时间来中断杂交，就能推断出基因的顺序？？ 。 转化、转导、接合的相同点 单方向转移 都产生部分二倍体 外源基因只有整合到环状染色体上才能 稳定的遗传 转化、转导、接合的不同 三者根本区别在于DNA转移的方式不同 转化：