20140408复习题..docVIP

四、问答题 如何区分不定芽和胚状体的结构？ 答(1)体胚具有极性，在胚性愈伤的相反的两端已分化出了茎端和根端。(2)在组织学上，胚状体的维管组织与母体植物或外植体的维管组织通常没有联系，其维管组织的分布呈“Y”字形，而不定芽的维管组织与外植体的密切相连。 液体振荡培养。 何谓体细胞杂交？请举例说明体细胞杂种培养的方法和过程。 答：体细胞杂交是指使不同的原生质体相互融合形成杂种细胞，再经过人工培养诱导杂种细胞分化形成植株的过程。 采用酶解法分离两原生质体，纤维素酶和果胶酶；用化学方法或者物理方法使原生质体融合，PEG或电融合；细胞生成细胞壁，进行杂种细胞的筛选：互补选择法或者机械分离法；杂种细胞的培养及再生（去分化，形成愈伤）. 影响体胚生长的主要因素： 外植体的来源及其所处的发育阶段（生理状态），是影响体胚的重要因子。如子叶，叶片，胚，下胚轴等。一般，幼嫩的外植体往往容易诱导体胚。但洋长春藤仅成熟的外植体才能产生体胚。品种及基因型的影响。 （2）植物生长调节物质 一般，生长素和CTK在胚性愈伤组织和体胚发生的诱导阶段起作用，而ABA在体胚发育的晚期（成熟期）发挥重要作用。 （3）培养基及主要营养因素 （4）培养条件：光照 原生质体融合有哪几种主要方法?1、自发融合 由于去壁的裸细胞具有彼此融合的能力，在制备原生质体的酶解保温处理过程中，相邻的原生质体能彼此融合形成含有多个细胞核的融合体，这种方式就是自发融合。 2、诱发融合 通过诱发剂是两个彼此相邻的原生质体相互融合的过程，称为诱发融合。 物理方法:电融合 化学方法:硝酸钾处理,或高PH-高钙处理(1973,Keller and Melchers,pH10.5 and 50mmol/LCaCl2.2H2O);硝酸钠 PEG处理法 5. 试简述F. Skoog（美国）科学家在植物细胞工程领域的贡献。 （1）1948 ，Skoog1962,Marashige和Skoog,烟草培养筛选出至今仍广泛使用的MS培养基。 （3）Skoog实验室的Miller发现了激动素,这是第一个被发现的细胞分裂素。 6. 使用植物生长物质应注意些什么?mg/ml较为方便，一般宜配制成0.5mg/ml的母液，这样的浓度既便于计算也可避免冷藏时形成的结晶。 由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同 IAA、玉米素等遇热不稳定的物质，不能进行高压蒸汽灭菌，必须采用过滤方法除菌。待经过高压灭菌后的琼脂培养基温度下降到50摄氏度左右时再加入生长物质 （3）生长素与细胞分裂素的比例 五．实验结果分析题 1. 某同学在实验课配制了配方为ＭＳ+ＫＴ３mg/L+NAA0.5 mg/L+0.9%琼脂+3%蔗糖（pH6.2）的固体培养基，但经过高压蒸汽灭菌后，发现该培养基不是呈透明的固体，而是呈较稀的流体状态，且颜色呈浅棕色，现请你帮该同学分析，找出他培养基配制失败的可能原因？ （1）琼脂质量较差，在使用前没有用蒸馏水洗涤，以减少其中的无机盐和可溶性有机物的含量。 （2）灭菌加热时间过长，温度过高，使得培养基中的蔗糖有机物质特别是维生素类的物质分解，使培养基变色变质，甚至难以凝固。 （3）在配置培养基时忘记调节PH或者调节不准，使得PH偏低，琼脂不能很好的凝固。 2. 某同学利用消毒剂消毒烟草叶片外植体后，接种到已灭菌的固体培养基中培养一周后发现，所接种的烟草叶片组织块部分出现黄化或褐化，部分培养瓶内出现菌斑有的甚至长出霉菌菌丝？请你结合你的实验经验，帮该同学分析造成其实验失败的可能原因？ （1）灭菌不彻底，或者同学操作不规范，没有无菌操作，导致有杂菌污染： （2）出现黄化的可能原因是：消毒时间过长、培养基的成分无机盐浓度过高，或者细胞分裂素6－苄基氨基嘌呤或激动素使用不当时，外植体发生褐变。此外，过高温度或光照过强,多酚氧化酶活性提高，加速褐变。 （3）同学接种外植体时，损伤了外植体，加速褐化。 六．应用题 1. 请你设计一个组培实验室，都需要哪些仪器设备，说明你设计组培实验室的各分室及其所需仪器设备的作用。 某地的一产量和品质都下降，怀疑是由病毒所至。请你设计一个病毒的鉴定和脱毒的技术方案。 图1.某同学怀疑感染病毒病的番茄植株的果实 病毒鉴定： 抗血清鉴定法:不同病毒的抗血清都有特异性，用特定病毒的抗血清来鉴定该种病毒。 电子显微镜检查法：直接观察病毒微粒是否存在，病毒颗粒的大小结构和形态等。 茎尖培养脱毒 一，脱毒前的准备工作： 1.被脱毒植物携带病毒的诊断 根据植物病毒病的症状特征和表现程度判断病毒类型及感染程度。 2.母体植株的选择和预处理 母体的选择3.材料的预处理：一般采用热处理方法 二、茎尖剥离(常规消毒后,在双筒体式解剖镜下操作)