CELL-培养用液课件.pptVIP

教学目的: 1、掌握细胞培养对水的要求。 2、了解常用的平衡盐溶液的配制及使用 方法。 3、了解细胞培养常用液有那些。 4、了解常用的培养液的种类。 一、平衡盐溶液（BSS） Balanced salt solution, BSS 组成：无机盐、葡萄糖 作用：1、维持渗透压、保持pH值稳定、提供简 单营养；2 、湿润组织，防止组织块干涸，并能洗涤组织块上的血污、杂质；3 、作为配制其它溶液的基础溶液（消化液：分散细胞；抗生素溶液；基础培养基等） 注意事项： 1、 配制平衡盐溶液需用三蒸水； 2、 D-Hanks与PBS不含Ca2+，Mg2+高压灭菌不容易出现沉淀，其它含有Ca2+，Mg2+的平衡盐溶液高压灭菌后易出现沉淀，应过滤使用； 3、PBS与D-Hanks不含有Ca2+，Mg2+常用于配制胰蛋白酶溶液（Ca2+，Mg2+ 会降低胰酶活性）； 4、Earle平衡盐溶液含有较高的NaHCO3，适合开放式培养；Hanks液含有较少的NaHCO3适合密闭式培养； 5、配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌。 常用的几种平衡盐溶液 用途：清洗材料、洗涤细胞、配制其他溶液。 二、 组织培养基 分类： 按来源分：天然培养基 人工合成培养基（基础培养基） 按基质状态分：半固体: 琼脂，明胶，血浆 液体 思考题： 生长液：基本培养基加入8%-10%的血清； 维持液：基本培养基加入3%-5%的血清； 完全培养基：人工合成培养基加上血清； 基础培养基又叫做人工合成培养基。 Hank’s+水解乳蛋白（进口） 一、培养基的基本要求 （一）营养成分 （二）促生长因子及激素 （三）渗透压 （四）pH （五）无毒无污染 营养成分 （1）氨基酸 ：细胞合成蛋白的原料 包括：12种必需氨基酸和谷氨酰胺 （2）单糖：六碳糖是最主要的能量来源 （3）维生素：在细胞代谢过程中扮演辅酶、辅基的角色 （4）无机离子及微量元素 促生长因子及激素 对于维持细胞的功能,保持细胞的形态具有十分重要的作用.如: 胰岛素(insulin):能够促进细胞利用葡萄糖与氨基酸,对细胞的生长有促进作用. 当细胞内、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压。这种情况下，水分通过渗透流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏、细胞周期停滞以及最终使细胞死亡。 PH值 细胞生长的最适PH为7.2-7.4 密闭培养时长生的CO2 与水结合能产生碳酸，培养基的PH值会很快下降，对细胞产生有害影响。 NaHCO3-CO2缓冲系统 NaHCO3+H2O Na++H2O+OH-+CO2 CO2稳定则上述反应平衡，PH值也相对恒定 （二）天然培养基 天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,常用的有血清、淋巴液、鸡胚浸出液及一些促贴壁的胶原成分等。 优点：营养丰富，培养效果好。 缺点：成分复杂；来源受限；批间有差异; 易污染。 血清 1.血清的主要作用 1）提供基本的营养物质 2）提供贴壁和扩展因子(FN) 3）提供激素及各种生长因子 4）提供结合蛋白，在细胞代谢中起作用 5）对培养细胞提供某些保护作用（中和胰酶消化、保护细胞免受机械损伤、微量元素解毒） 2.使用血清的缺点 1）可能改变细胞在体内的正常状态：体内细胞不和血清直接接触，而体外培养时直接接触，使之偏离原始状态; 2）有些物质对细胞产生毒性作用，如：补体， 抗体，细菌毒素等; 3）每批血清之间都有差别; 4）取材过程有可能带入支原体、病毒，导致实验失败。 4、鉴定内容： 血清质量高低取决于： 取材对象 :用于制备血清的动物要健康无病，并在指定的出生天数之内； 取材过程 :严格按照操作规程进行，并进行严格的质量鉴定。 1）理化性质：蛋白含量越低越好; 2）微生物检测主要是检测支原体和病毒; 3）促生长效果。 96孔板 每孔200ul 细胞悬液稀释至 5个/ml，1个/200ul （1）计算细胞悬液的总量及不同样品的使用量 标准样 3个96孔板 20ml/板 备检样 3个96孔板 20ml/板 （2）稀释 细胞浓度通常为105～107 105个细胞/毫升 5个细胞/毫升 稀释用已经灭菌的基础培养基 10