生物化学_李赞东_第八章第五节课件.pptVIP

* 第五节 核酸的性质 一、核酸的水解 （一）酸水解 对酸敏感性： 糖苷键 ? 磷酸酯键 嘌呤碱糖苷键 ?嘧啶碱糖苷键 （二）碱水解 DNA一般对碱稳定。 RNA 的磷酸酯键易被碱水解，产生核苷酸混合物。 （三）酶水解 （1）底物专一性 ribonuclease， RNase deoxyribonuclease，DNase （2）作用方式 核酸内切酶（endonuclease） 核酸外切酶（exonuclease） （3）断裂位点 3’-OH与磷酸基之间 5’-OH与磷酸基之间 限制性内切酶（restriction endonuclease） 限制性内切酶的作用特点 极高专一性； DNA两条链都被切断，形成粘末端（cohesive end）或平末端（blunt end）； 只降解外源DNA，不降解自身细胞中的DNA； 性质比较稳定，需要Mg2+及一定盐离子。 DNA的限制酶图谱 为在DNA分子上指出限制酶切片段的排列所制作的图谱。? A C B D A 0 5300bp Hpa I SV40 DNA 二、核酸的酸碱性质 磷酸、碱基的解离(两性解离) 核苷酸pI RNA pI=2-2.8 生理状态下，磷酸基团全部解离，呈多阴离子状态。 三、核酸的紫外吸收 吸收峰：260nm 紫外法测核酸含量: 1 OD=50 ?g/ml DNA =40 ?g/ml RNA 测纯度：OD260/OD280 DNA(1.8), RNA(2.0) 四、核酸的变性、复性 （一）核酸变性定义 天然核酸在某些物理或化学因素作用下，双螺旋区的氢键断裂, 变成单链。其紫外吸收增高，黏度下降，生物活性全部或部分丧失。这种现象称为核酸的变性。 变性DNA紫外吸收增强，称为增色效应（hyperchromic effect） （二）核酸变性的因素 1. 过酸、过碱 2. 变性剂 (尿素，甲醛) 3. 热变性 特点：爆发式 Tm（melting temperature） 称为核酸解链温度(或融解温度)。即加热变性使DNA双螺旋结构丧失一半时的温度。 影响Tm的因素： 1. C-G 含量 C-G%=(Tm-69.3) X 2.44 2. DNA的均一性 3. 介质中的离子强度 （三）核酸复性（renaturation） 变性DNA在适当条件下，可使两条彼此分开的链重新结合成为双螺旋结构，使其物理、化学性质及生物活性得到恢复，这一过程称为复性。 DNA复性后紫外吸收降低称为减色效应（hypochromic effect）。 退火（annealing） 热变性的DNA在缓慢冷却条件下，两条单链再重新结合恢复双螺旋结构，这种复性叫退火。 复性的速度： 片段越大复性越慢； 浓度越大复性越快。 （四）核酸的杂交（hybridization） 两条来源不同但有核苷酸互补关系的DNA单链分子之间，或DNA单链分子与RNA分子之间，在去掉变性条件后，互补的区段能够复性形成双链DNA分子或DNA / RNA异质双链分子。这一过程称为核酸的分子杂交。 ? 核酸杂交的应用 Southern blot (DNA印迹) 是英国的分子生物学家Southern 1975年发明的一种利用分子杂交原理鉴定DNA的方法. * * *