(精)化学生物学 化学物质与酶——最新.ppt

第七章 化学物质与酶的相互作用 自然界中发现的酶已达3000多种，而且这个数目随着基因工程和蛋白质工程方面研究的发展而大大增加。 酶可以直接作为药物用于医药工业，如溶菌酶可治疗各类炎症，如咽喉炎、口腔溃疡、慢性鼻炎、带状疤疹及各种刀伤引起的发炎等，天冬酞胺酶治疗癌症，治疗血栓的尿激酶等。 酶也广泛应用于食品工业、化学工业、医药工业、环保工业等，在临床检验、生物分析等领域也广泛使用。 另外，每种酶都有一定的抑制剂，这类抑制剂可以参与生物代谢过程的化学调控，因此有些酶抑制剂可能属于毒物，而有些抑制剂可以作为药物使用。 酶抑制剂作为新药寻找与开发，在近一、二十年来分子生物学发展的基础上得以实用化。 化学物质（无机物质、有机物质和高分子物质）与酶的相互作用包括化学物质对酶的激活作用、抑制作用、改性作用和酶对化学物质的催化作用等。 第一节 化学物质对酶的抑制作用 凡能降低酶促反应速度的作用，称为酶的抑制作用。能使酶活性受抑制的物质，称为酶的抑制剂。近年来对酶抑制作用的研究进展迅速。 由于通过酶抑制作用的研究，不仅对了解酶的专—性，酶活性部位的物理和化学结构，酶的动力学性质以及酶的作用机制等；而且对了解药物和毒物作用于机体的方式及机理等也有重要意义；对代谢途径中酶的调节也能提供信息。 抑制剂之所以能抑制酶促反应，主要是由于它们能使酶的必需基因或活性部位的性质和结构发生改变，从而导致酶活性降低或丧失。 按抑制剂作用的方式不同，酶的抑制作用可分为可逆和不可逆两种类型。 一、可逆抑制作用 按可逆抑制剂对酶—底结合的影响不同，可分为许多类型，它们的反应历程可用一通式表示： 速度方程通式 根据此反应历程,根据快速平衡学说或恒态学说推导，得到其总速度方程通式如下 1，竞争性抑制作用 竞争性抑制作用中I只与自由酶结合，因而阻止S与酶结合。而S又不能与EI结合，I也不能与ES结合，所以EIS不存在；EI亦不能分解成产物。 —个竞争性抑制剂只增加酶—底结合的表现Km(Kmapp)，即I浓度增加，Kmapp就增加；而Vmax则保持不变。在竞争性抑制剂存在下, 要达到最大反应速度Vmax，必须加入更高的底物浓度。如[S]＞100Km时，Vmaxi可达Vmax。 竞争性抑制剂对酶促反应的抑制程度，决定于[I]，[S]，Km和Ki的大小。[I]一定，增加[S], 减少抑制程度；[S]一定，增加[I]，增加抑制程度，Ki值较低时，任何给定[I]和[S]，抑制程度都较大；Km值越低，在一定[S]、[I]下，抑制程度越小。 竞争性抑制作用的双倒数图 竞争性抑制作用Ki的求解 ①从双倒数图计算出表观米氏常数Kmapp，然后代入Kmapp=Km(1+[I]/Ki)可计算出Ki。 ②从双倒数图求得各I浓度下的Kmapp值对相应[I]再作图，从再制图的纵截距可直接测得Km，从其横截距可直接测得Ki。 ③从不同固定[I]下所作一簇直线的斜率1/S对相应[I]再制图，其纵截距为Km/Vmax, 斜率为Km/VmaxKi，横截距即为-Ki。 ④Dixon作图法求Ki 竞争性抑制剂的IC50值 取决于实验所用的酶和底物浓度，当酶的浓度固定时，IC50值与Ki、Km和底物浓度[S]呈如下关系： 根据该方程式，当底物浓度大于Km值时，IC50值高于Ki值，尤其当底物浓度较高时，Ki值偏低更加明显。 竞争性抑制剂的结构特征 ①底物类似物 由于人们对一个酶所催化的底物性质了解的比较多，因此，常常利用酶的底物类似物作为竞争性抑制剂研究一些三维结构不清楚的酶活性中心的结构。另外，也可以根据底物的结构特点设计一些临床上使用的药物。 例如， ?-葡糖苷酶抑制剂如阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖（voglibose）和米格列醇（Miglitol） 黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤，进而被氧化成尿酸，黄嘌呤氧化酶抑制剂-别嘌呤醇治疗痛风病就是通过抑制黄嘌呤氧化酶，降低尿酸的生物合成。 ②过渡态类似物 酶催化化学反应效率高的原因在于酶能与高能态的过渡态相结合，从而大大降低了化学反应的活化能。 如果对催化某一特定生物化学反应的酶的三维结构尚不清楚，可以根据其生化反应的过程，设计合成具有特定结构、疏水性匹配、电子和空间因素与过渡态类似的稳定化合物，作为该酶特异的抑制剂，这无疑为药物合理分子设计提供了另一强有力的手段。 例如，乙酰胆碱酯酶(AChE)的羟基与酯酶的酯解部位形成共价键，其四价氮上的强正电荷与酯酶的阴离子部位呈静电联接。酶的乙酰化很快导致酯键断裂和胆碱的消除，乙酰化酶随即与水反应而使酶再生并放出乙酸。 氨基甲酸酯杀虫剂是乙酰胆碱酯酶水解过渡态的稳定类似物，能与乙酰胆碱酯酶结合部位紧密结合而抑制乙酰胆碱酯酶。 又如苯甲酰丙氨醛是胰凝乳蛋白酶的过渡态抑制剂，