开放性实验论文..docxVIP

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开放性实验论文.

摘要本实验采用7-8天小乳鼠进行实验,断头取脑后用急性分离的方法得到小鼠海马神经元细胞,再用膜片钳技术测定神经元细胞的放电特性,在数据采集与处理阶段主要使用Pclamp10.5,用Clampex软件采集电信号,用Clampfit软件对所采集数据进行分析,得到小鼠海马神经元的放电特性。实验对小鼠海马神经元细胞放电特性的研究对人体细胞放电特性的认识有重要的指导意义。本文主要分三部分介绍实验过程,在第一部分中将主要叙述小鼠海马神经元细胞的急性分离原理及方法;在第二部分将对膜片钳技术进行详细叙述;第三部分将介绍Clampfit软件的使用方法。在第四部分中我们通过分析以往同类型实验的实验数据,总结得到不同电磁场对小鼠海马神经元细胞离子通道的影响。关键词:海马神经元 急性分离 膜片钳技术 细胞膜离子通道 Clampex目录一、大鼠海马神经元急性分离11、引言 12、材料与方法 12.1材料及仪器 12.2制备方法 3二、细胞膜离子通道膜片钳研究方法41、膜片钳技术 42、膜片钳基本原理 53、膜片钳技术记录模式 64、膜片钳技术测量方法 8三、Clampfit软件的使用方法111、基本操作112、标准I-V图的制作133、曲线拟合方法15四、对以往实验的总结与分析181、不同强度工频磁场照射对神经细胞离子通道的影响182、不同强度恒定磁场对神经元细胞离子通道的影响183、射频磁场对神经元细胞离子通道的影响204、结论20参考文献21一、大鼠海马神经元急性分离1、引言海马结构位于侧脑室下角底内,是种系发生上比较古老而简单的皮质部分,具有一致的组织结构,细胞分层排列,是研究中枢神经系统解剖和生理的可塑性模型。随着种系进化,其相对体积减少,绝对体积增加,在人类达到了高水平。根据Isaacson (1974年)的分层法,可将海马的细胞结构分成七层,即分子层、隐 窝层、辐射层、锥体细胞层、多形细胞层、海马槽和上皮细胞层[1]。其中,位于辐射层下面的锥体细胞层是海马的锥体细胞聚集区,分离的该区锥体细胞具有典型的中枢神经元代表性。作为边缘系统的一个重要部分,海马与许多高级神经活动、行为反应以及植物性神经功能有重要关系,一直被视为神经科学研究的模型[2]。由于海马与学习、记忆关系密切,且对缺血和缺氧、癫痫、衰老、化学损害剂和有害物理辐射等许多致病因素较为敏感,近年来越来越引起研究者的广泛兴趣。2、材料与方法 2.1 材料及仪器动物:小乳鼠,鼠龄 7~8 天,雌雄不限。山西医科大学实验动物中心提供。试剂:Pronase E,河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)、氯化镉()、 4-氨基吡啶(4-AP)、氯化四乙铵(TEA-Cl)、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸 (HEPES)、己二醇-双(2-氨基乙基)四乙酸(EGTA)、氯化铯(CsCl)、氟化铯 (CsF)、。(1)孵育液(ACSF)(mmol/L):NaCl 128,KCl 5, 1.5, 2, 2, 25,Glucose 10,HEPES 10,KOH调节pH 7.4。(2)全细胞电流记录液细胞外液( mmol/L):NaCl 130,KCl 5.4, 2, 1,Glucose 10, HEPES 10,NaOH调节pH 7.4。电极内液(mmol/L):KCl 120, 1, 1,HEPES 10,EGTA 10,KOH调节pH 7.3。 (3)钠电流记录液 标准细胞外液(mmol/L):NaCl 50,KCl 5.4, 2, 1,Glucose 10, HEPES 10,AchCl 90,NaOH调至pH 7.3。电极内液(mmol/L):CsCl 70,CsF 70,HEPES 10,EGTA 10, 3, 2,CsOH调至pH 7.2。 (4)钾电流记录液 标准细胞外液(mmol/L):NaCl 130,KCl 5.4, 2, 1,Glucose 10, HEPES 10,NaOH调节pH 7.3。电极内液(mmol/L):KCl 130, 2, 1,HEPES 10,EGTA 10, 2,KOH调节pH 7.2。 (5)钙电流记录液 标准细胞外液(mmol/L):NaCl 130,KCl 5.4, 2, 2,Glucose 10, HEPES 10,NaOH调节pH 7.3。电极内液(mmol/L):CsCl 140,HEPES 10,EGTA 10, 3,Tris调节 pH 7.2。仪器设备:膜片钳放大器、微电极拉制仪、微电极抛光仪、微电极操纵器、倒置相差显微镜、电子天平、渗透压仪、酸度计、恒温水浴箱、磁力搅拌器、超净工作台、防震台、磁场发生装置。 解剖器械、烧杯、容量瓶、刻度滴管、移液器、培养皿、Pasteur吸管、离心管等。2.2 制备方法 2.2.1 大鼠海马神

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