血清α羟丁酸脱氢酶测定.doc

1. 实验原理 α-HBDH催化α-酮丁酸还原成α-羟丁酸,同时使还原型辅酶Ⅰ(NADH)氧化成氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)，其氧化速率与样本中α-HBDH的活性成正比，通过测定340nm波长处NADH下降的速率，即可求出样本中α-HBDH的活性。 α-HBDH α-酮丁酸+NADH+ H+ α-羟丁酸+ NAD+ 2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊要求。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放： 3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂： 本科使用上海科华生物工程股份有限公司提供的液体单试剂，可直接使用 6.1.1 试剂组成 R1: 叠氮钠 0.2g/l 2-Oxobutyrate（酮丁酸） 4.4mM Phosphate（磷酸缓冲液） 100mM R2: NADH 0.18mol/L Phosphate（磷酸缓冲液） 50Mm 叠氮钠 0.2g/l 6.1.2试剂准备： R1:R2=4：1混合试剂为工作液。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示： 当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀或试剂空白吸光度小于1.000时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项 试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品： 使用朗道公司提供的朗道复合校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品.SOP文件。 6.3 质控品： 使用朗道公司提供的朗道复合血清。参见生化检验质控品.SOP文件。 7. 仪器：科华450全自动生化分析仪。 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数： 8.1.1 波长：340nm 8.1.2 反应温度：37℃ 8.1.3 比色杯光径：1cm 8.2仪器操作步骤： 参见生化检验科华450全自动生化分析仪操作规程.SOP文件。 9. 结果的传输及报告的签发 结果由仪器传送至LIS系统，由生化室人员双签字审定，再由LIS系统传送至各病区。操作程序见《检验科LIS运行程序》。 10. 质量控制： 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 10.1. 质控结果分析： 检验人员对质控结果进行分析，在发现质控数据违背质控规则（即失控）后，通知组长，协助处理。组长根据项目失控情况，按照失控处理程 序逐级查找原因，并进行处理，直至重新测定该项目质控结果合格，并填写失控报告。 11. 计算方法： 以朗道复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以IU/L报告。手工测定计算方法为： ALT(IU/L)= ΔA/min×F Vt F =------------- ×1000 =8095 Vs×消光系数 Vt：反应总体积； Vs：样品体积； 消光系数：指NADH在340nm波长下毫克分子消光系数为6.22。 12. 参考值范围:成人 80-180U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义： (-羟丁酸脱氢酶（(-HBDH）是乳酸脱氢酶的一种同工酶，它以(-羟丁酸为底物。与乳酸脱氢酶的其它同工酶相比，(-HBDH在心肌组织中含量很高，因此(-HBDH对心肌梗死的诊断更敏感和更特异。为区别肝脏和心脏疾病，(-HBDH/LDH比率有助于肝病和心脏疾病的鉴别。实质性肝病的(-HBDH/LDH比率降低；而心肌梗死的(-HBDH/LDH比率升高。 14. 操作性能 14.1 线性范围：0-1000U/L。 14.2 试剂空白吸光度：340nm处A(1.000 14.3 准确性：相对偏差不超过±10%。 14.4 批内差：变异系数（CV%）≤4%。 14.5批间差：≤6% 15. 超出范围结果处理： 当样品测定