NK细胞和CD8+T细胞对靶细胞杀伤机制的异同..doc

NK细胞和CD8+T细胞对靶细胞杀伤机制的异同 自然杀伤细胞（natural killer cell, NK）是先天免疫中的一类十分重要的淋巴细胞，通过其细胞毒活性可以杀伤靶细胞。CD8+T细胞细胞表面表达CD8分子，可以特异的杀伤靶细胞，又称为细胞毒性T细胞或杀伤性T细胞。NK细胞和CD8+T细胞都具有杀伤靶细胞的作用，但它们对靶细胞的杀伤既有相同之处，又有不同之处。本文对NK细胞和CD8+T细胞杀伤靶细胞机制的异同进行了概述。 1.NK细胞和CD8+T细胞杀伤靶细胞机制的相同之处 NK细胞和CD8+T细胞都可以通过以下途径杀伤相应的靶细胞：穿孔素、颗粒酶、Fas/FasL、TNF-α、INF-γ和LT途径。 1.1穿孔素途径 穿孔素（perforin）也称为成孔蛋白(performing pertein, PFP)，NK细胞和CD8+T细胞上都有表达。1988年,Podack 等[1]报道了人穿孔素的结构和表达,人穿孔素基因定位于10 号染色体10q22，基因全长6218bp ,其cDNA 长为1668bp。人穿孔素蛋白由534 个氨基酸残基组成,其分子量约为66～75KD。 穿孔素贮存于CD8+T细胞和NK细胞胞浆颗粒中，是CD8+T细胞和NK细胞杀伤靶细胞的主要毒性蛋白。细胞激活后发生脱颗粒（含有穿孔素、颗粒酶等），释放穿孔素。在Ca2+ 的存在下,穿孔素单体可迅速附着于靶细胞膜,嵌入细胞膜的双层磷脂中,多个单体聚合形成打孔聚合物,在靶细胞膜上形成不同孔径(50～160nm) 的跨膜孔道,从而导致靶细胞膜去极化。Na+、H2O经过通道进入胞内,一些电解质和大分子物质流出胞外,改变细胞膜渗透压，最终引起靶细胞渗透性死亡。此过程与补体介导的溶细胞过程类似，溶解细胞过程比较迅速。本身可能释放A型硫酸软骨素蛋白聚糖、硫酸软骨素A限制因子，因此可避免穿孔素对自身细胞的攻击,又可继续攻击其它靶细胞[2]。 穿孔素还可以通过颗粒酶促进靶细胞凋亡而杀伤靶细胞[3]。穿孔素形成的传膜孔道有利于颗粒酶进入靶细胞。此外，穿孔素还引起颗粒酶在靶细胞胞浆和胞核的重新分布，使颗粒酶聚集在其裂解部位，有利于裂解靶细胞。 1.2 颗粒酶途径 颗粒酶即颗粒相关丝氨酸酯酶，属于糜蛋白酶超家族，在N端具有保守序列[4]。目前人们已经认识到的颗粒酶有10多种，而研究较多的主要是颗粒酶B。颗粒酶B分子量约为35KD,编码人类颗粒酶B的基因位于人类14q11.2上,含有5个外显子[5]. 颗粒酶与穿孔素一起贮存于NK细胞和CD8+T细胞的胞浆颗粒中，细胞激活胞吐过程中，颗粒酶和穿孔素一起释放入细胞间隙。颗粒酶可借助于穿孔素在靶细胞上形成的跨膜通道进入细胞中，直接作用于靶细胞核，通过激活半胱天冬氨酸蛋白酶（caspase）级联反应而诱发靶细胞凋亡[6]。颗粒酶B能活化大多数procaspase，是诱发凋亡能力最强的酶。四肽序列异亮－谷－苏－天冬氨酸是颗B最适意识别单位，也是caspase－8和caspase－10的识别位点。同时颗粒酶B还可以裂解多聚ADP核糖聚合酶、DNA依赖性蛋白酶和核有丝分裂器等核底物，直接引起细胞凋亡。Sutton等[7]认为,Bcl－2 可阻断由颗粒酶B和穿孔素引起的细胞凋亡。 颗粒酶和穿孔素还可以通过细胞内非caspase依赖性途径诱发细胞凋亡，这种作用不被病毒产物CrmA 所抑制，而颗粒酶caspase依赖性细胞毒作用可以被病毒产物CrmA 所抑制[3]。 Shi等[8]发现尽管颗粒酶B也能自主进入靶细胞,不需要穿孔素的辅助,但穿孔素对凋亡过程的起始和颗粒酶B 进入核内有关键作用。纯化的颗粒酶B 以及其它颗粒酶单独存在不能引起靶细胞凋亡。 1.3 Fas/FasL途径 Fas分子也称为APO－1或CD95，属于Ι型跨膜糖蛋白，含有335个氨基酸残基，分子量约为45000－50000[9]。Fas分子膜外部分的氨基酸序列与肿瘤坏死因子受体和神经生长因子受体同源，可以与Fas配体或抗Fas抗体结合并将刺激信号传入膜内部分；膜内部分与TNF－R1的膜内部分同源。 FasL是Ⅱ型跨膜糖蛋白,呈球状三聚体结构,与TNF 超分子家族具有同源性[10]。FasL全长278个氨基酸残基，经过糖基化的FasL分子量为36－43KD。细胞受到抗原刺激或在IL-2存在的条件下，其表面可以迅速地被诱导出FasL。 当FasL与Fas结合时，Fas可以向细胞传递“死亡信号”，数小时内细胞凋亡[11-13]。Fas的凋亡信号主要是通过与其胞浆区相关的死亡结构域蛋白（FADD）介导的。Fas与FasL结合后，受体发生多聚化，胞浆区的死亡结构域蛋白（DD）也发生多聚化，使得位于胞浆内的FADD可以通过其C端的DD与受体胞浆的DD结合。FADD一方面通过C端的D