探讨甲氨蝶呤对大鼠输卵管雌孕激素受体的影响.docVIP

探讨甲氨蝶呤对大鼠输卵管雌孕激素受体的影响摘要： 目的 观察不同剂量甲氨蝶呤（MTX）对假孕SD大鼠输卵管雌孕激素受体的损伤，探讨MTX治疗后对后续妊娠的潜在影响，为临床使用甲氨蝶呤保守治疗异位妊娠提供理性的合理选择。方法 40只SD雌性大鼠，致假孕状态后再MTX腹腔注射，随机分为1mg/kg组、2mg/kg组、5mg/kg组及对照组(腹腔注射生理盐水)，10d后处死各组大鼠，取双侧输卵管壶腹部组织，进行雌、孕激素受体的免疫组化染色。结果 ER阳性表达率在不同剂量组的差异具均有统计学意义(P0.05）。结论 MTX可损伤输卵管雌激素受体，且损伤效应存在一定的量-效关系，提示临床中使用MTX保守治疗异位妊娠时，应减少剂量，否则可能会造成后续的再次异位妊娠或继发不孕。 关键词： 甲氨蝶呤 输卵管 雌激素受体 孕激素受体 　　 近年对输卵管妊娠的早期诊断率显著提高，使得药物保守治疗得以应用。目前，甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）是输卵管妊娠的药物保守治疗中常用和首选的药物，该药可抑制滋养细胞增生，破坏绒毛，促使胚胎组织坏死、脱落，从而达到保守治疗输卵管妊娠的目的［1］。雌、孕激素受体广泛存在于女性生殖道组织中，两者的的协调表达状态与胚泡着床机制密切相关。本文首次系统研究不同剂量MTX对雌性假孕SD大鼠输卵管黏膜雌、孕激素受体的损伤效应及可能的量-效关系，探讨MTX治疗后输卵管损伤对后续妊娠的潜在影响，为临床使用MTX保守治疗异位妊娠提供理性的合理选择。 1 材料与方法 1.1 实验动物及试剂 雌性未孕SD(sprague dawley)大鼠40只，6～8周龄，体重180～200g，由温州医学院实验动物中心提供；甲氨蝶呤购自江苏恒瑞医药股份有限公司；妊马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)购自杭州动物药品厂；人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin，HCG)购自丽珠集团制药厂；雌激素受体(estrogen receptors，ER)、孕激素受体(progesterone receptors，PR)单抗免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。 1.2 方法 （1）假孕大鼠模型的制备及MTX处理：40只雌性SD大鼠，清洁实验动物条件下饲养，置于室温25℃，正常的昼夜光照，实验前参照文献中使用的方法制作假孕模型［2］，所有大鼠皮下注射PMSG 50U，48h后再次皮下注射HCG 100U。致假孕状态后再行MTX腹腔注射，依剂量不同，假孕大鼠被随机分为1mg/kg（组Ⅰ，10只大鼠）、2mg/kg（组Ⅱ，10只大鼠）、5mg/kg（组Ⅲ，10只大鼠），另设置腹腔注射生理盐水0.5ml为对照组（组Ⅳ，10只大鼠）。MTX处理后10d，处死各组大鼠，因输卵管妊娠多发生在壶腹部，因此本研究取邻近卵巢部位的双侧输卵管壶腹部组织。所有标本用10%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，制成5μm厚的石蜡切片，进行雌、孕激素受体的免疫组化染色，观察不同组中MTX对输卵管雌孕激素受体的损伤效应与量-效关系。本研究中所有的动物实验均按照我国有关动物实验的立法进行。（2）免疫组织化学染色及判断标准：采用免疫组化SP二步法，参照文献中的方法判定染色结果［3］。每张免疫组化切片在200倍光镜下观察5个视野，阳性细胞表达占30%为(+)，占50%以上为(+++)，两者之间为(++)，未见阳性表达或只有极少数阳性细胞染色为阴性表达(-)。以PBS代替一抗作为阴性对照。 1.3 统计学处理 ER、PR的阳性表达率为计数资料，采用SPSS 10.0软件包建立数据库，进行统计分析；不同剂量MTX处理后的阳性表达率比较采用Kruskal-wallis检验。以P0.05），详见表1和图2。表1 不同剂量MTX作用后假孕大鼠输卵管中ER、PR表达情况 　　3 讨论 3.1 MTX在输卵管妊娠保守治疗中的应用 近年来，随着盆腔炎症性疾病的增多，异位妊娠的发生率呈上升趋势。究其原因，主要的致病因素是各种原发、继发的输卵管器质性或功能性病变，如盆腔炎、盆腔手术、输卵管发育不良等机械性病变可损害输卵管结构及生理功能的完整性，影响输卵管内膜纤毛细胞的分泌和摆动，影响管壁平滑肌层的节律性收缩，干扰受精卵在输卵管中的输送，导致宫外孕或不孕症发生［4］。进一步的研究发现，输卵管壁的肌层收缩和纤毛细胞的摆动功能在一定程度上受输卵管局部组织中雌、孕激素的双重调节，局部平衡的激素环境对于协调受精卵的输送与完成正常的受孕过程至关重要，而雌、孕激素的协调作用紊乱，容易致输卵管妊娠［5］。甲氨蝶呤是输卵管妊娠的药物保守治疗中常用，并作首选的药物，该药可抑制滋养细胞增生，破坏绒毛，促使胚胎组织坏死脱落，从而达