天竺葵叶片显微结构观察..docVIP

研究生课程论文（作业）封面 （ 2009 至 2010 学年度 第 2 学期） 课 程 名 称：植物显微技术 课 程 编 号：2.549 学 生 姓 名：郑坤 学 号：904257 年 级：2009级 提 交 日 期： 2010 年 6 月 17 日 成 绩：__________________ 教 师 签 字：__________________ 开课---结课：第 周---第 周 评 阅 日 期： 年 月 日 东北农业大学研究生部制 天竺葵叶片显微结构观察 (东北农业大学园艺学院蔬菜学专业 郑坤 904257) 摘要：天竺葵，拉丁名：Pelargonium hortorum，别名：洋绣球、入腊红、石腊红、日烂红、洋葵、天竺葵、驱蚊草生性健壮，很少病虫害其适应性强，喜阳光，好温暖，稍耐旱，怕积水，不耐炎夏的酷暑和烈日的曝晒。52～60℃之间，软的材料用熔点54～56℃的石蜡，稍硬的材料用熔点为58～60℃的石蜡。具体过程是：常温下将削好的蜡屑，逐渐投入盛有材料的二甲苯小瓶中至饱和→36～40℃温箱中加蜡屑→将小瓶中原液倒去1/2后补入1/2纯蜡（已熔化的），此过程重复2～3次→全部换纯蜡2次（每步骤2h）→包埋。 将经过浸蜡的天竺葵叶片连同熔化的石蜡，一起倒入置备好的纸盒内，然后放在凉的机器上，使其立刻凝固成蜡块。待石蜡完全凝固(约30min)后即可取出备用。 1.2.5切片 与常规方法一致，要注意蜡块一定要平整。切片时，右手摇动旋转轮手柄，左手用毛笔，将切成的连续蜡带挑起，切一段后（大约30片左右）用毛笔将此蜡带移至一张黑纸板上，准备粘片。由于环境温度高，切片时容易黏着在刀上，可以使用冰块来降低切片机的温度，使用丝绸擦拭刀片，以防止静电造成的黏着现象。 1.2.6展片、贴片 在洁净的载玻片上均匀涂上少许蛋白甘油。蛋白甘油用鸡蛋清和甘油按1:1的体积比充分搅拌混匀制成，可以用作粘附剂。将蜡带小心地放在载玻片上，然后将载玻片放在展片机上，待蜡带展平后，在35℃温箱中烘干，使蜡带充分粘附在载玻片上。 1.2.7脱蜡复水及染色 为了使切片各部分组织分辨的更清楚，常进行染色处理，本实验采用的是番红-固绿双重染色法。首先将粘有材料的载玻片放在二甲苯中10~15min脱蜡，100%乙醇→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→蒸馏水→番红（水溶性染料）→水洗浮色→30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→85%乙醇→固绿→95%乙醇→100%乙醇→1/2乙醇+1/2二甲苯→纯二甲苯→纯二甲苯。以上各步骤，除特殊标注外，处理时间均为1～2min。固绿之后再次进行的脱水与透明是为了除去染色过程中切片中进入的水分。 1.2.8中性树胶封藏 将染好色的载玻片，用中性树胶进行封片。封片用的盖玻片要清洁，封片时要注意不要产生气泡。封好片后，放于37℃温箱烘干。永久保存。 2结果与分析 将做好的石蜡切片在显微镜下观察，能够清晰的看清叶片中的显微结构：栅栏组织，海绵组织，维管束，气孔等。用相机拍照，得到以结果： 图一：天竺葵叶片纵切面×10 图二：栅栏组织，海绵组织×10 图三：天竺葵叶片纵切面×20 图四：栅栏组织，海绵组织×20 图五：叶脉×20 图六：主脉表皮细胞×20 图七：维管束×20 图八：主脉表皮细胞×20 图九：表皮细胞×40 图十：表皮细胞×40 图十一：维管束×40 图十二：叶片纵切片细胞×40 总的来说该实验已经达到预期效果，但是还存在一些问题：1、包埋过程中小方盒下部的石蜡没有凝固完全就将材料放在了小方盒中，所以材料没有包埋在石蜡块的正中间，导致材料在蜡片的边缘；2、在贴片的过程中，其中的一个载玻片上涂抹的粘贴剂偏少，以致后来的脱蜡复水及染色步骤将其表面的材料冲碎了，没有得到完整的材料。  植物显微技术 - 3 -