“酶”处理染色质免疫沉淀（琼脂糖微球式）..docVIP

“酶”处理染色质免疫沉淀（琼脂糖微球式）操作方法 试剂： 甘氨酸溶液（10X） （4X） （4X） ChIP（10X） ChIP（2X） 5 M NaCl 0.5 M EDTA 1M DTT DNA漂洗（缓冲）液 DNA洗脱（缓冲）液 DNA纯化柱 蛋白酶混合抑制剂（200X） （10 mg/ml） 微球菌核酸酶（2000 gel units/μl）NEB #M0247S 蛋白酶K（20 mg/ml）NEB #P8102S 人对照基因RPL30外显子3引物 小鼠对照基因RPL30内含子2引物 组蛋白H3（D2B12）XP?（ChIP） #4620 #2729 ChIP级蛋白G琼脂糖微球 #9007 不包含的试剂： PMSF （0.1 M） 乙醇（96-100%） 1X PBS 无核酸酶的水 Taq DNA聚合酶 dNTP（三磷酸脱氧核苷酸）混合液 体内交联，细胞核制备并用核酸酶S7消化染色质 开始之前： 每次实验需要刺激或处理大约4X 107个细胞。这些细胞中提取的染色质可以用于多达10次单独的免疫沉淀实验。 以Hela细胞为例，这相当于5个15 cm培养皿中细胞密度达到90%时的总细胞数（一般每个盘中的培养基为20 ml）。 另外准备一盘细胞用于血球计数板法测定细胞数。 取出并需预热的试剂： 200X蛋白酶混合抑制剂 1 M的二硫苏糖醇 0.1