选1.2.1微生物的实验室培养答题.ppt

单个细胞 单个菌落 从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的过程。 何为分离纯化？ 如何纯化？ 什么是菌落？ 微生物群 分散或稀释 （二）纯化大肠杆菌 ◇原理： 在培养基上，将细菌分散或稀释成单个细胞，使其长成单个菌落。 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 3.功能： 1.定义： 菌 落 鉴定菌种的重要依据（微生物的菌落特征因种而异） 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 单个细胞 单个菌落 从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的过程。 何为分离纯化？ 如何纯化？ 平板划线法 如何分散成单个细胞？ 稀释涂布平板法 微生物群 分散或稀释 （二）纯化大肠杆菌 ◇原理： ◇接种方法（纯化方法） 在培养基上，将细菌分散或稀释成单个细胞，使其长成单个菌落。 分区划线法 连续划线法 （1）概念与原理： 聚集的菌群 连续划线 稀释分散 单个细胞 单个菌落 生长繁殖 1、平板划线法 (2)“平板划线”实验操作 1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。 2、在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞 3、将试管口通过火焰 .4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 .5、将试管通过火焰，并塞上棉塞 .6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 8、将平板倒置放入培养箱中培养。 划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照） 1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 分区划线法 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. ②划线首尾不能相接 ③每次划线前接种环进行灭菌 ④划线后,培养皿倒置培养 平板划线法注意事项: （1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞 杀死接种环上原有微生物 接种结束后 每次划线前 取菌种前 目的 灼烧时期 （2）在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 （3）在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 3个划线平板 1个不划线平板 （重复实验） （空白对照） （3）培养 放入37℃恒温箱中培养12h～24h ①系列稀释操作： ②涂布平板操作： (1)概念与原理： 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 单个菌落 涂布平板 (2)操作： 生长繁殖 2、稀释涂布平板法 涂布器 ①系列梯度稀释操作 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 9mL无菌水 注意：移液管需要经过灭菌；试管口和移液管离火焰1～2cm处。 1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按101～106顺序编号。 2、用移液管吸取1ml菌液，注入101倍稀释的试管中。使菌液与水充分混匀。依次类推，直至完成最后一支试管的稀释。 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1 ∽2cm处。 微量 移液器 ①系列梯度稀释操作 101 102 103 104 105 106 ②涂布平板操作： 1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 滴 2、取少量稀释液（不超过0.1ml ），滴加到培养基表面 灼 3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。 试 涂 4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 课题1　微生物的实验室培养 专题2　微生物的培养与应用 学习目标 1、说明有关培养基的基础知识，概述无菌操作技术包括的主要内容（重点） 。 2、能制备培养基，并进行微生物的分离和培养。（难点） 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一 度遭受毁灭性的打击。在生产过程中， 出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现导致生产失败的