实验1培养基母液的配制..docVIP

实验1 培养基母液的配制 实验目的 二、实验用具 o．5二尝二二·揣二二二：蕊；乳誓 1004、50n尢、25毗)、细口瓶(1阗0址)。药勺、小玻璃棒。 三、实验药品 按培养基配方准备 四、培养基母液的配制 …(一)大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的 尸苎，把各种化合物扩大10倍，用感量为0．01g的扭力天平，分别用50mL 苎杯称量，用重蒸馏水溶解。以佃配方为例(表1)。溶解时在每只烧杯中加 A30-40n正重蒸馏水，置于酒精灯上，加热使其溶解(注意温度不可过高， 甲～70、)。溶解后，在10叩证量筒中，混合定容于1阗0n厶重蒸馏水中。 苎混苎定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾，形成磷酸三 苎：磷酸钙之类不溶于水的沉淀。将配好的混合液，倒人细口瓶中，贴好标签 保存于冰箱中。配制培养基时，每配1咖n止培养基取此液1mn尢。 …，(二)微量元素母液的配制 无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用 §的1m倍，用感量为0．0叩1g的电光分析天平，分别用50毗烧杯称量，用 苎苎苎水溶解，以肥配方为例(表2)。溶解时，在每只烧杯中加入重蒸痴汞 A毫升(切勿加多)。在酒精灯上缓缓加热以增加溶解速度。待全部溶解后， 混合定容于100mL容量瓶中保存于冰箱中，配制培养基时，每配制1 000毗 培养基取此液1mLo KN％ ~-hN03 Ca022H20 Mg,~)47H20 KH：P03 化合物名称 MnS04．4H20 ZnS04．7H20 CuS04．5H20 ~3B03 Na2M004．2HzO Ⅺ COCl2．6H20 定容于1 000mL重蒸馏 水中，最后加入Caf：12·2H20 每升培养取此液100吐 (三)铁盐母液的配制 铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只 需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸 二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定， 不易发生沉淀。这种母液的配制方法是：用感量为0．01g扭力天平称取5；57g 硫酸亚铁(FeS04．7U20)和7．45g乙二胺四乙酸二钠(Na：—EDTA)，分别用 蒸馏水溶解。定容于1 000mL蒸馏水中，常温保存。配制培养基时，每配制 1 000血叔此液5mL。 · (四)激素及其他有机物母液的配制 激素类、维生素类及用量较小的有 机物类，为了使用方便和准确，也应配制成母液。母液的浓度，根据培养基配 方的需要量灵活确定。经常使用的母液浓度为0．2-2吨／mL，但也有例外。 如肌醇用量较大，可配制成10—20吨／mL的母液浓度。这类物质的称量，必 须用感量为0．0001 g的电光分析天平。 咖 5m 栅 I船 1m 6 4 3 1 溶解各种有机化合物所用的溶剂不同，必须注意。例如配制生长素类，如 2,4-D、萘乙酸、吲哚乙酸等，应先用少量1—2mL95％酒精溶解，然后用重 蒸馏水定容；’配制细胞分裂素时，先用少量的mHCl或mNaOH溶解，然后 再用重蒸馏水定容；配制叶酸时，应先用少量稀氨水溶解，然后再用重蒸馏水 定容。 · · 配制母液必须用重蒸馏水，配制后存放于冰箱中，可保存几个月。当发现 母液中出现沉淀或霉团时，则不能继续使用。 烟酸 甘氨酸 肌醇 2．4-D 1 nag／mL 2 nag／mL 20 nag／mL 1 mg／mL 1 nag／mL 0．5 mg／mL 20 g／L 8 g／L 5．8 KT 0．5 nag／mL ， 表3 按MS配方需要量和母液浓度计算各种母液吸取量并填入下表 名称rvtsiE~-二：笔1 000mL~二二之，二二二， *gcff~素 微量元素 铁盐 维生素B1 维生素B6 烟酸 甘氨酸 ／llti$ 2,4-D 盯 蔗糖 琼脂 0．4 nag／L 0．5 mg／L 0．S mg／L 2 mg／L 100 mg／L 0．5 mg／L 1 mg／L 20 g／L 8 g／L 10倍液 100倍液 5 mL／L 1 mg／mL 1 mg／mL 1 mg／mL 2mg／mL 20mg／mL 1 rag／mi, 0．5 mS／吐 KN03(硝酸钾) Ca(N03)2·4H20(硝酸钙) KCl(氯化钠) MgS04·7H20(硫酸镁) NaaS04(硫酸钠) NaH2P04·21420(磷酸二氢钠) MnS04·4H20(硫酸锰) Na2M004·2H20(钼酸钠) CuS04·5U20(硫酸铜) Pe(C6U507)·3H20(柠檬酸铁) 烟酸 甘氨酸 盐酸吡哆素(维生素B6) 盐酸硫铵素(维生素B1) 泛酸钙 蔗糖 NH4N03(硝酸铵) KN03(硝酸