I分子生物学重点.docxVIP

基因诊断技术：PCR技术 核酸探针杂交技术 基因芯片(gene chip)技术 限制性片段长度多态性(RFLP) 单核苷酸多态性(SNP)发展趋势 ：“自动化”、“程序化”、“非标记技术”和“多病种”等特色 。基因治疗：1、基因替代(gene replacement) 2、基因修正(gene correction) 3、基因增强(gene augmentation) 4、基因抑制(gene constraint)和/或基因 失活(gene inactivation) 5、反义疗法 基因基因的分子生物学概念：基因是核算分子中贮存遗传信息的遗传单位，是RNA和蛋白质相关遗传信息的基本存在形式，是指贮存RNA序列信息和有功能的蛋白质多肽链序列信息、以及表达这些信息所必须的全部核苷酸序列。大部分生物中构成基因的核算物质是DNA，少数生物是RNA，如RNA病毒。结构基因：在基因片段中，贮存着一个特定的转录RNA分子的DNA序列，这段序列决定该RNA分子的一级结构，就称为基因序列。外显子（exon）：结构基因中在成熟RNA分子中保留的相对应的序列。内含子（intron）：指与RNA分子剪接时删除部分相对应的结构基因序列。启动子（promoter）：是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。位于结构基因转录起始点的上游，启动子本身并不被转录。终止子：终止子是结构基因3’端下游的一段DNA序列，其中有GC富集区组成的反向重复序列，转录后在RNA分子中形成特殊的结构以终止RNA链的延伸。操纵原件（operator）：操纵原件是被阻遏蛋白识别与结合的一小段DNA序列。反义RNA：属小分子RNA，其碱基序列正好与mRNA互补，从而可与mRNA配对结合形成双链，抑制mRNA作为模板进行翻译。是一种新的基因表达的调控机制。基因组的结构和功能基因组（genome）：细胞或生物中，一套完整单倍体的遗传物质的总和。原核生物染色体基因组结构基因特征：1 结构基因的编码是连续的2 结构基因之间的编码序列不重复3 基因组中很少有重复序列4 结构基因多为单拷贝基因（编码rRNA的基因除外）5 结构基因在基因组中所占的比例（约50%）远大于真核基因组，小于病毒基因组质粒（plasmid）：是细菌细胞内的、染色体外的共价闭合的环状DNA分子（covalent closed circularDNA，cccDNA）。质粒的结构与功能特点：1 能够独立于细胞的染色体DNA而进行复制2 对宿主细胞的生存不是必需的3 能赋予细菌特定的遗传性状DNA操作的基本技术核酸分子杂交（nucleotide molecular hybridization）以DNA的变性、复性为理论基础指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链的过程 。基本操作过程包括待测DNA样品的制备和基因探针的标记；待测DNA样品的电泳分离；电泳分离的DNA经变性、转移、固定到合适的固相支持物；特异性核酸探针与膜上DNA片段杂交，放射自显影或显色检测目的DNA的存在。 原位杂交（in situ hybridization，ISH）：即利用分子杂交技术来进行基因及其表达产物定位分析的一种技术。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）是一种在体外特异地扩增已知基因的方法；由K. Mullis于1983年建立；可用于分析基因及其产物的水平变化；可进行实时、定量分析；可结合免疫沉淀的方法确定蛋白质与DNA序列的相互作用。 反转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）：是将RNA的反转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。RT-PCR：是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA进行定性及半定量分析的最有效方法。 DNA序列分析：有双脱氧链终止法和化学裂解法。DNA芯片（DNA chip）：在固相支持物上有序固化寡核苷酸或DNA探针，与待测荧光标记样品进行杂交；通过对杂交信号的检测、比较和分析，得出样品的遗传信息(基因序列及表达)； 亦被称作DNA微阵列(DNA microarray)。 染色质免疫共沉淀-芯片（chromatin immunoprecipitation-chip，ChIP-on-chip）：特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，解交联后对目的片段进行纯化、扩增和荧光标记，再用于芯片分析；寻找特异性蛋白在基因组中的结合位点，获得蛋白质与DNA相互作用的信息。 重组DNA技术克隆(clone)： 来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning)，即无性繁殖。重组DNA技术（recombinant DNA technology）：