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加校正因子的主成分自身对照法 一、定义及适用范围 加校正因子的主成分自身对照法，即以主成分作为对照的内标法，校正因子可以在检测时测定，但需提供杂质对照品，也可在建立方法时将测得的校正因子载入质量标准，供以后常规检验使用，无需长期提供杂质对照品，但也仅适用于已知杂质的控制。建议：校正因子在0.8-1.2时可不予校正。 校正因子计算公式： f= 式中：f—校正因子； As—杂质对照品峰面积或峰高； Cs—杂质对照品浓度； Ar—待测成分对照品峰面积或峰高； Cr—待测成分对照品浓度。 二、校正因子的测定 在校正因子的研究和使用中，标准物质、色谱条件、溶剂、检测波长等均是重要的影响因素，研究中需要予以关注。 2.1?校正因子的测定需要用到特定杂质及主成分的标准物质，这些标准物质应具备量值准确的特点，符合标准物质（对照品）的相关要求；其次，确定校正因子的分析方法应与最终确定的质量标准方法一致，色谱条件等需经筛选优化后确定，如有变更，需考虑对校正因子的影响，必要时重新确定；第三，要关注影响待测物UV吸收的各种因素，如溶液制备所用溶剂最好与最终确定的流动相相同，检测波长最好在特定杂质及主成分UV曲线的峰或谷处，避开吸收值急剧变化波段，以保证测定方法具有较好的耐用性，并保持测定结果的恒定。 2.2?一般情况下，校正因子可视具体情况通过如下几种方法确定：（1）单浓度点测定：制备适当浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液，分别进样测定，照上式计算，得到校正因子。（2）多浓度点测定：制备适当的高、中、低三水平浓度的特定杂质对照品溶液和主成分对照品溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样测定，照上式计算各校正因子，计算RSD，求平均值，得到校正因子。（3）标准曲线法测定：精密称取杂质对照品和主成分对照品，分别制备系列溶液（涵盖定量限、标准限度），分别进样后，按最小二乘法以进样量对响应值（峰面积等）进行线性回归，求得两条标准曲线，两曲线斜率之比即为校正因子。（4）吸收系数比值法：对于UV检测器来讲，两物质的相对校正因子实际上也是两物质以流动相为溶剂，在检测波长处的紫外吸收系数E1%1cm之比，故可按吸收系数法测定法的相关技术要求测定各自吸收系数，如对照品级别的标准物质、高中低三水平浓度测定、吸收度介于0.3～0.8之间、至少5台不同型号的UV分光光度计、2份供试液同时平行制备测定、同台仪器2份供试液的平行测定结果不超过±0.5%等。测定两物质的吸收系数后，经统计分析确定两物质吸收系数，计算比值，求得校正因子。 上述各方法中，（1）和（2）法较为简捷，可以快捷地量化特定杂质与主成分紫外吸收特征的差异，多用于评估采用主成分自身对照法定量杂质时是否需要校正。但如采用加校正因子的主成分自身对照法定量杂质，需将标准物质赋值信息转化为校正因子固化在质量标准中，那么校正因子的准确性非常关键，校正因子的准确计算应符合更为严格的要求，需要考虑并控制求算校正因子过程中的各种误差因素，以及仪器通用性和色谱系统的耐用性等因素，以便使求得的常数更为准确并具代表性，此时采用（3）、（4）法更为适宜，如能考虑到测定人员、不同试验室因素的影响，会更加符合常数求算的基本要求。 三、方法验证 校正因子的测定属于有关物质方法验证中的一个项目，一般采用有关物质的测定方法，杂质对照品和主成分对照品线性浓度从定量限至限度的120%或150%，一般取5-6个点，使用3台不同的仪器测定，按照上述方法（3），计算平均校正因子。 有关物质方法学验证主要包括： 系统适用性、方法专属性、精密度（仪器精密度、方法精密度和中间精密度）、线性、准确度（已知杂质的回收试验）、检测限和定量限、溶液稳定性和耐用性。 试验内容 概念 溶液配制份数 进样针数 评定标准 系统适用性 系统适用性是对分析设备、电子仪器与实验操作、测试样品等整个系统进行评估的指标 空白溶液1份供试液1份 进1针 进6针 杂质峰峰面积RSD≤2.0%，保留时间RSD≤1.0%；杂质峰的拖尾因子≤2.0%，理论塔板数应符合质量标准的规定 方法专属性1 专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能够正确鉴定检出被分析物质的特性 空白对照1份 辅料溶液（或起始原料、中间体）1份 供试液1份 每份各1针 空白对照无干扰；主峰与相邻杂质峰的分离度＞2.0 方法专属性2 未破坏样品、光湿热10天破坏样品和酸碱氧化破坏样品各1份 每份供试液进1针；空白溶液、酸碱空白及氧化空白各1针 降解杂质峰与主峰的分离度≥2.0 精密度 在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度） 仪器精密度 在同样