正常和肿瘤组织细胞的培养..doc

正常和肿瘤组织细胞培养 内容： 正常组织细胞培养： 上皮细胞的体外培养；血管内皮细胞的体外培养； 肾小管上皮细胞的培养； 巨噬细胞的培养； 淋巴细胞的培养 肿瘤细胞培养 不同组织细胞和器官的结构和功能、生长特性不同，在体外培养中所需的分离方法和生长条件也不同。 上皮细胞的体外培养： 许多器官上的上皮细胞具有特定的功能，如肾和肠道上皮细胞具有吸收功能，肝和胰上皮细胞的分泌功能，肺上皮细胞的气体交换功能； 上皮组织还常发生肿瘤。 上皮细胞的基本特征： 1.上皮组织的形态结构： 群体依赖性（population dependence)；接触抑制（contact inhibition) 2.上皮细胞的极性 ： 贴壁依赖性细胞-贴壁生长 生长基质 3 . 上皮细胞间的连接 体外培养的上皮组织细胞的生长生物学 1. 形态学结构： 均质性、透明性很强，结构不明显 2. 体外培养上皮组织的生长与增殖特征 (1) 体外培养的特殊条件： 防范微生物污染； 生长基质的支持； 特殊的培养基（M199 RPMI1640 DMEM Fam F12 无血清培养基）；去成纤维细胞 防范微生物污染 根据上皮组织分布的特性，位于体表或衬贴消化道、呼吸道内等处的上皮组织，直接暴露或同外环境相接触，组织本身带有各种病原微生物或受其污染的机会较多。要求在组织取材时就严格灭菌；分离、种植、培养等诸多操作步骤上都要设法消除可能会出现的微生物污染。培养中所使用的各种液体，包括细胞保存液、分离液以及培养基等需添加抗生素，抗生素浓度比其它组织培养高。 生长基质的支持 皮细胞依赖贴附于某种支持物上才能生长，即所谓的贴壁依赖性细胞。 在培养器皿表面包被生长基质，如胶原或其它细胞外基质成分等，模拟体内的基膜结构，不仅特别有利于上皮细胞的贴附和生长，也有利于培养细胞的分化．使细胞极性表现更为明显。 特殊的培养基 M199和RPMI1640培养基仅适用于上皮组织的短期培养和维持其生存，对上皮组织的长期培养和促增殖作用并不明显。 DMEM和HamFl2培养基用于上皮组织培养时有其特殊作用。可促进上皮细胞的贴附；维持上皮细胞在体外培养状态的分化。HamFl2培养基的特殊性特别适用原代上皮细胞的培养，培养基成分中添加微量元素的无机离子，更加利于细胞的生长和代谢。 在实际培养时，将DMEM与HamFl2按一定比例混合用于上皮组织培养。 培养液特殊添加剂 常用的促细胞生长因子及使用的终浓度 添加剂 终浓度 添加剂 终浓度 BSA 10-5mol/ml EGF 5ng/ml transferrin 5-10 mg/ml FGF 5ng/ml insulin 5 pg/ml NGF 5ng/ml 氢化可的松 10-5mol/ml 去除成纤维细胞 上皮组织借薄层基膜和结缔组织相连。取材分离细胞时会带入少量结缔组织成分，常常造成成纤维细胞与上皮细胞混和生长。由于成纤维细胞具有增殖能力和粘附能力强的特点，很容易“疯长”为培养物中的优势细胞群，从而干扰或抑制上皮细胞的生长，成为上皮细胞的“细胞污染源”。 因此在上皮细胞的取材、分离、种植和传代的培养过程中，要特别注意上皮细胞的纯化，去除和抑制成纤维细胞的生长。 体外培养上皮细胞的形态学变化 体外培养上皮组织细胞的观察与检测 1. 一般形态学观察 光镜： 形态、轮廓、生长情况等。 细胞规则、明亮而饱满、细胞轮廓不清 电镜： 桥粒、形态结构特征、细胞间关系 培养液pH变化： 颜色变化？ 培养物的污染情况： 透明度变化？ 2. 组织化学与免疫组织化学观察与检测 酶类： 碱性磷酸酶； 琥珀酸脱氢酶 特异性抗原标记物： 角蛋白、上皮细胞膜抗原；VIII因子、晶体蛋白、唾液酸糖蛋白 二、血管内皮细胞的体外培养 人脐静脉内皮细胞的培养 1.主要材料：组织来源： 婴儿脐带 培养用液： M199+20%FCS； D