幸福活力缓解体力疲劳功能研究报告..docVIP

幸福活力海参饮料 缓解体力疲劳功能研究报告 2012 年12 月3 日 “幸福活力海参饮料”缓解体力疲劳功能的研究 报告正文 1 材料和方法 1 . 1 样品：幸福活力海参饮料，人拟用量为6Oml / 6Okg · BW · 日，受试物为棕色液体。 1 . 2 试验动物：18 一22g 雄性SPF 级昆明种小鼠160 只，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，合格证号：SCXK （军）2009-0004 0289244 。 1 . 3 实验动物饲养环境：SPF 级动物实验室，合格证号：SYXK （津）2008-0004 。动物房温度20 ～25 ℃ ，相对湿度40-70 ％。饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，生产许可证号：SCXK -（京）2009-0008 。 1 . 4 试验方法1 . 4 . 1 检测依据：《 保健食品检验与评价技术规范》 （2003 年版）。 1 . 4 . 2 剂量设计及分组：幸福活力海参饮料，人拟用剂量为6Oml/60kg ? Bw ? 日，本试验设计了四个大组，分别用于负重游泳试验、血清尿素氮、肝糖原及血乳酸测定。每组40 只，每大组又分对照组及低、中、高三个剂量组（每组10 只），剂量分别为5ml / kg . BW 、10ml / kg . BW 、20ml / kg . BW 。即相当于人拟用剂量的5 倍、10 倍、20 倍。低、中剂量组分别取幸福活力海参饮料内容物50ml和100ml ，均加蒸馏水至200ml ，充分混匀，高剂量组是用幸福活力海参饮料直接灌胃，灌胃量为0 . 2ml / 10g ·BW，对照组给予等量蒸馏水，各组经口灌胃，每日一次，连续给予30 天后按1 . 6 实验方法进行测定。 1 . 5 主要仪器：游泳箱，紫外可见分光光度计（TU-1810 型），全自动生化分析仪( TOSHIBA TBA-4OFR ) ，乳酸测定仪（YSI 2300 STAT PLUS ）。 1 . 6 实验方法： 1 . 6 . 1 负重游泳试验：小鼠连续经口灌胃受试物30 天，末次给予受试样品30min 后，将尾根部负荷5 ％体重铅皮，水深30cm ，水温25 ℃ ，进行游泳试验，记录小鼠入水至力竭身亡时的游泳时间。 1 . 6 . 2 血清尿素氮测定：小鼠连续经口灌胃受试物30 天，末次给予受试样品30min 后，在30 ℃ 的水中不负重游泳90min ，休息60min 后从眼球处采全血，分离血清，然后用全自动生化分析仪进行尿素氮含量测定。尿素氮试剂盒购自北京九强生物技术有限公司。 1 . 6 . 3 肝糖原测定：小鼠连续经口灌胃受试物30 天，末次给予受试样品30min 后处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏100mg 加入8m1TCA后每管匀浆1 分钟，将匀浆液倒入离心管以3000 转／分离心15 分钟，取上清液1ml 放入10ml 的离心管中每管加入95 ％的乙醇4ml 充分混匀，用干净塞子塞上室温下竖立过夜，沉淀完全后将试管于3000 转／分离心15 分钟，倒掉上清液并使试管倒立放置10 分钟，用2ml 的蒸馏水溶解糖原振荡直至完全溶解，将10ml 蒽酮试剂用力加入各管，置冷水中冲凉，达到冷水温度后，将其浸于沸水浴15 分钟后，置冷水中冲凉，当所有试管都达到室温后，用紫外可见分光光度计在62Onm 波长下测定吸光度，计算肝糖原含量。 每100g 肝组织中的糖原（mg ）=×0.5××100×0.9 1 . 6 . 4 血乳酸测定：小鼠连续经口灌胃受试物30 天，末次给予受试样品3Omin 后采小鼠尾血约40μl ，滴入已放入8μl 破膜液（4μl 15 % EDTA 和4μ 12 % SDS ）的0.5ml Eppendorf ( Ep ）管中，充分混匀，冰浴保存。然后，将采血后小鼠放入30 ℃ 的水中不负重游泳10min 后立即采血，休息20min 后再次采血，三次的采血量及处理方法相同。然后用乳酸仪测定血乳酸。根据以下公式计算血乳酸曲线下面积： 血乳酸曲线下面积＝1 / 2×（游泳前血乳酸值＋游泳后0min 的血乳酸值）×10 + l / 2× （游泳后0min 的血乳酸值＋游泳后休息20min 的血乳酸值）× 20 = 5×（游泳前血乳酸值＋3× 游泳后0min 的血乳酸值＋2× 游泳后休息20min 的血乳酸值）。 1 . 6 . 5 实验数据统计：各组数据均采用SPSS11.5 FOR WIND0WS 中方差分析进行统计分析，方差不齐者采用数据转换，如转换后仍不齐则采用非参数统计。2 结果 2 . 1 受试物对实验小鼠体重的影响 由表1～4 可见各剂量组小鼠实验初期、中期、末期体重及增重与对照组比较，