I制剂学技术提高植酸酶热稳定性的研究进展.docVIP

制剂学技术提高植酸酶热稳定性的研究进展 摘 要 植酸酶作为一种生物型饲料添加剂对提高饲料中磷的利用率、动物的生产性能及减轻动物高磷排泄物对环境的污染具有重要意义，因此，植酸酶的研究有重要的科学和实用价值。 但由于其热稳定性差，推广和应用受到了限制。 关键词 植酸酶 热稳定性 制剂学 植酸酶称为肌醇六磷酸酶，属于磷酸单酯水解 酶， 是催化植酸及植酸盐水解成肌醇与磷酸 (磷酸 盐)的酶类总称。 植酸酶是一种重要的工业酶，是近 年来出现的一种新型绿色添加剂，添加到动物饲料 中，主要用于猪和家禽，并在一定程度上应用于鱼。 植酸酶作为单胃动物饲料添加剂使用时，可以使植 物性饲料磷的利用率提高60 %， 减少饲料中无机磷 的添加量，降低饲料成本；能够使动物粪便中无机 磷的排出量减少 40 %，降低磷对环境的污染，保护 环境并可改善可用性矿物质、微量元素、氨基酸和 能源；还可以解除植酸对金属离子和蛋白质的螯合 作用， 提高机体对蛋白质和多种微量元素的利用 率，促进动物生长发育，提高生产性能。 植酸酶的抗逆性，尤其是热稳定性不能满足饲 料及饲料加工的要求，成为制约植酸酶推广应用的 重要限制性因素之一。 鉴于植酸酶对提高畜牧业生 产效益和降低磷对环境的污染有重要意义，提高植 酸酶的耐热性成为科研领域研究的新热点。 1 影响植酸酶产品热稳定性的因素 1.1 植酸酶菌株 从烟曲霉和黑曲霉中分离的植酸酶添加到饲 料中，在制粒温度为 75 ℃时，这 2 种植酸酶在颗粒 饲料中的活性回收率是相似的; 但在制粒温度为 85 ℃时，来自黑曲霉的植酸酶活性比来自烟曲霉的 植酸酶活性要丧失得更多。 1.2 制粒过程 制粒过程中的高温、高湿和挤压是造成植酸酶 活性损失的关键因素：1) 高温引起酶蛋白分子中氢 键和疏水键断裂，从而改变酶分子的构象，使酶失 活。 生物酶制剂热稳定性差，易失活，在常温条件下 长期存放的干燥酶粉也易失活。颗粒温度达到 84 或 87 ℃ 时 ， 则酶的活性丧失 17 % 或 54 % ；2)R P Igamnazarov 等（1999）指出，植酸酶去折叠温度与水 分活度相关。 完全干燥的植酸酶 去 折 叠 温 度 为 165 ℃；含 12 %的水分时去折叠温度迅速降为95 ℃； 含 16 %的水分时去折叠温度降为 88 ～ 90 ℃。 在制 粒时，湿与热同时起作用。 相比干热，湿热更具穿透 性，更能够穿透到植酸酶内部，破坏酶的三维结构； 3) 高压能改变酶蛋白的空间多维结构而导致酶变 性。 1.3 动物消化道 pH 酶的活性具有确定的最适 pH，pH 的变化可引 起酶中基团的解离，导致酶结构变化，从而影响酶 的活性。 动物消化道内有一条适合生化反应进行的 pH 谱线。 Lindberg(2007)报道，猪日粮中添加植酸酶 后，在胃中可检测到总酶活超过 50 %，极显著高于 小肠前段和后段。 1.4 植酸酶产品的剂型 植酸酶产品包括,液体酶、粉酶、普通颗粒酶和 包被型颗粒酶。 液体酶的热稳定性差，但它是在制 粒后喷涂在颗粒表面， 因此避免制粒中湿热破坏。 粉酶完全暴露在湿热环境中，热稳定性较差。 普通 颗粒酶隔离分子与外界接触，一定程度上提高植酸 酶的热稳定性。 包被颗粒酶是将成型后的颗粒植酸 酶采用包衣剂， 在表面形成一层坚固而易溶的薄 膜，使植酸酶颗粒与外界隔离，同时避免饲料中矿 物元素等对酶活的破坏， 耐高温水平也有一定提 高，热稳定性最强，使用范围更广。 Eeckhout 等（2000）研究发现，在 82 ℃条件下， 猪饲料中颗粒植酸酶的活性保留值为 60 %。 而 NOVO 和 BASF 公司生产的包被颗粒植酸酶在 85 ℃ 下处理 30 s，酶活性保留率约达到 70 %；而对照组 是未经包被的酶粉，其酶活保留率仅为 20 %。 2 制剂学技术提高植酸酶热稳定的方法 提高植酸酶热稳定性常用的方法有以下几种: 1)自然选择法：即筛选耐高温菌种释放的植酸酶；2) 固定化包埋：将酶固定在不溶性载体上，从而稳定 酶构象，消除逆性因子的变形作用，从而提高植酸 酶稳定性；3)蛋白质工程法：即通过基因工程重组得 到耐高温酶的基因，再表达获得热稳定性植酸酶；4) 化学修饰法: 通过化学试剂特异性修饰酶活性中心 的某个或某类氨基酸， 从而稳定蛋白质的构象，提 高其耐热性；5)制剂学方法：通过向植酸酶溶液添加 稳定剂、将植酸酶与载体结合制成普通颗粒、将植 酸酶颗粒进行液体后喷涂和包被等制剂学技术来 提高植酸酶的热稳定性。 2.1 添加稳定剂 1)盐。 盐的添加能显著改善酶的热稳定性，因为 盐类主要存在离子键作用，当酶的活性中心含有离 子作为配位体时， 降低分子内静电排斥作用， 增加 酶的稳定性。 另外，盐可作为水分子的替代物占据 水的位置，排除自