开题报告-山羊妊娠黄体的细胞学构筑及其..docVIP

山羊妊娠黄体的细胞学构筑及其 与卵泡生长发育的关系为了探查山羊卵巢黄体中是否存在弥散性神经内分泌细胞，采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶法对12～18月龄妊娠奶山羊卵巢中弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了研究。结果显示：黄体组织中各区均含有催产素、神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺样免疫反应阳性细胞。:三者可做为弥散性神经内分泌系统的细胞标记物）共存于山羊黄体细胞中，而在黄体细胞以外的卵巢细胞中未观察到该现象，说明羊的卵巢发生黄体化的同时也存在着部分细胞的神经内分泌化，但仍未明确揭示这些标记物到底共存于哪一类型黄体细胞，也未说明在不同生理时期这些标记物的分布变化。由此可见，有关黄体组织细胞构成、分型、各型结构特征、各型黄体细胞中标记物是否存在以及存在的意义及对其它组织的影响等的认识对于黄体神经免疫内分泌学研究及相关应用研究都有着十分重要的意义。本实验以前期研究的工作为基础更进一步的探讨山羊的黄体组织形态学与卵泡生长发育的关系，为合理调控山羊繁殖和进行山羊胚胎移植等应用技术提供依据，并为黄体功能学研究及黄体细胞的体外分离培养奠定基础。 4实验内容 分别采集从不同屠宰厂区取6-21胚龄的胎儿（分为妊娠前期、中期、后期），取出卵巢。进行材料的光镜和电镜固定及制样，进行卵巢黄体的大体形态学分类. 本实验拟运用常规组织学制片技术（石蜡切片—HE染色技术）和透射电镜技术（醋酸铀染色）对处于不同生理周期（妊娠期的前期、中期和后期）关中奶山羊的黄体组织的显微和超微结构进行详细观察，确定其细胞分型、各型的结构特征及不同时期的细胞学变化规律；并结合卵巢各级卵泡的数量和直径变化的组织形态观察测量和统计分析，掌握妊娠黄体的形态学特点。 运用常规组织学技术和免疫组织化学方法对不同生理期山羊黄体发育过程中黄体细胞的类型及各型黄体细胞中标记物（雌激素、孕酮）分布变化规律与卵泡生长发育的关系进行研究，并分析不同生理期山羊黄体细胞的类型对各级卵泡直径及数量的影响。为合理调控山羊繁殖和进行山羊胚胎移植等应用技术提供依据。 结果的观察、整理和分析，数据的统计，光镜、电镜照像及图像分析处理。 5方法及技术路线 5.1方法 5.1.1取材、固定及切片的制备 采集从不同屠宰厂区取6-21胚龄的胎儿（按体长分为妊娠前期、中期、后期），取出卵巢。 将卵巢纵切一分为二，一半材料放进4%多聚甲醛固定液进行固定，另一半材料经2.5%戊二醛进行固定。 梯度乙醇脱水，二甲苯透明。石蜡包埋，连续切片厚度6～7μm.经过4%多聚甲醛固定的组织运用常规石蜡切片-HE染色技术对卵巢和黄体组织形态进行详细观察，2.5%戊二醛液固定的组织按照透射电镜技术要求制样，对黄体超微结构进行详细观察，确定黄体细胞分型、各型的结构特征及不同时期的细胞学变化规律；并结合卵巢各级卵泡的数量和直径变化的组织形态观察测量和统计分析，探讨不同时期黄体细胞类型与卵泡生长发育的关系 5.1.2组织学染色 组织学染色包括：苏木精-伊红染色、免疫组化染色、醋酸铀染色。 5.1.3光镜和透射电镜观察、照相 5.2 .技术路线图 6预期结果 （1）对妊娠前期、妊娠中期和妊娠后期关中奶山羊的黄体组织的显微和超微结构的详细观察，可以确定不同妊娠阶段黄体细胞的类型、各型的组织结构特征及不同妊娠阶段的细胞学变化规律。 （2）结合卵巢各级卵泡的数量和直径变化的组织形态观察测量和统计分析，得出不同生理期卵巢黄体细胞构型与各级卵泡生长发育的关系。 （3）有关不同生理期山羊黄体组织的细胞学构筑及其与卵泡生长发育的关系研究成果将为临床合理调控山羊繁殖和进行山羊胚胎移植等应用技术提供依据，并为黄体功能学研究及黄体细胞的体外分离培养奠定基础。 7本研究的创新点 本项目主要运用组织学常规石蜡切片制作技术，结合透射电镜技术观察妊娠关中奶山羊黄体组织的显微和超微结构，以确定黄体细胞的分型、各型的显微和超微结构特征及不同周期阶段的细胞学变化规律，提供有关奶山羊黄体组织细胞构筑的详细资料，并结合卵巢各级卵泡的数量和直径变化的组织形态观察测量和统计分析，探讨不同生理期卵巢黄体与各级卵泡生长发育的关系，从而将基础形态研究与临床应用有机结合起来，研究结果不仅为黄体的相关基础和应用研究提供必要的基础形态资料，也将为保护和推广陕西地方良种、提高其繁殖性能提供理论依据。 8研究工作进程 2009年2月采集发情周期和妊娠期山羊卵巢，进行材料的光镜和电镜固定及制样，进行卵巢黄体的大体形态学分类. 2009年3月制作山羊卵巢和黄体组织石蜡切片，并进行组织结构观察，对切片中各级卵泡数量进行计数，对卵泡的直径进行加权平均值的计算和统计分析；完成部分电镜样品的切片和观察，整理实验数据和结果。