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第二章 克隆技术 (3)长期培养中,培养物胚胎发生和器官形成能力会下降。 无机营养成分:水、矿质元素 有机营养成分:蔗糖、氨基酸和维生素 琼脂:0.7-1% 激素:生长素,细胞分裂素 PH值:5.0-6.0 * 第二节 植物的克隆 植 物 克 隆 理 论 基 础 植物克隆的方法) 植物组织培养 植物细胞的全能性 技术基础 植物克隆的发展(不要求) 一、植物细胞的全能性 1、定义: 植物体的每个有核的生活细胞都具有发育成完整植株的潜能。 2、原因: 植物体的每个有核的生活细胞含有发育成完整植株所需的全套遗传物质(或全套基因组)。 3、特点: (2)不同植物或同一植物的不同基因型的个体,由于个体间的遗传性差异,细胞的全能性表达程度也不同。 受精卵 生殖细胞 体细胞 > > (1)不同植物细胞全能性表达的难易程度不同: 一般情况:细胞分化程度越高,全能性越难表达 (特例:生殖细胞分化程度高,且全能性易表达) 遗传物质的改变 染色体畸变 细胞核变异 非整倍体的产生 细胞或组织中激素平衡被打破 对外源生长物质的敏感性发生改变 其他原因产生了缺乏成胚性的细胞系 生长发育条件的改变 (2)尽量选择性状优良、细胞全能性表达充分的基因型。 4.植物克隆成功的条件: (1)明确特定植物细胞全能性表达的条件。 二、植物组织培养 1.植物组织培养的程序 (4)培养:诱导形成愈伤组织、诱导再生出新植株 (1)配制培养基 (2)消毒、取组织块 (3) 接种 2.植物组织培养的发育过程 离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 胚状体 植物体 脱分化 再分化 外植体 3.植物组织培养的方法 (1)细胞培养 指将组织培养过程中形成的愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中,进行悬浮培养,得到分散游离的悬浮细胞,通过继代培养使细胞增殖,从而获得大量的细胞群体的一种技术。 (2)器官培养 植株器官→愈伤组织→胚状体→试管苗→植株 指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体、无菌培养。 (3)原生质体培养 愈伤组织→胚→试管苗→植株 植物组织细胞 愈伤组织细胞 悬浮培养细胞 原生质体 纤维素酶和果胶酶 0.5-0.6mol/L的甘露醇 植株→细胞→愈伤组织→单细胞→胚→试管苗→植株 4、植物组织培养的应用 (1)植物的快速繁殖 (2)无病毒植物的培育 (3)提取细胞代谢产物 (4)制造人工种子 (5)转基因植物的培育 培养植物细胞(包括原生质体),借助基因工程的方法,将外源遗传物质(DNA)导入受体细胞(包括原生质体受体)中,或通过细胞融合,显微注射等将不同来源的遗传物质重新组合,再通过对这些转基因细胞或重组细胞进行培养,获得具有特定性状的新植株. 植物细胞工程的概念和操作过程 植物细胞培养技术 植物器官培养技术 原生质体培养技术 植物细胞杂交技术 植物组织培养基主要成分 切取 接种 愈伤组织 试管苗 适量的激动素和细胞分裂素配比可诱导芽的分化。 适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素,可诱导生根。 细胞分裂素中等,生长素少 *
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