LJ-57ALT测定..docVIP

实验诊断学目的： 1.1. 丙氨酸氨基转移酶是肝脏疾病诊断最常用的指标之一。 1.2. 为保证（ALT） 检验程序的原理： 方法学原理：速率法 2.2. 将一滴11μl患者样品滴于干片上，样品就均匀分布并渗透到下面的试剂层。分布层含有谷丙转氨基质底物—L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠。丙氨酸氨基转移酶催化L- 丙氨酸的氨基向α-酮戊二酸转化，生成丙酮酸和谷氨酸。然后，乳酸脱氢酶(LDH) 催化丙酮酸和NADH 转化为乳酸和NAD+. NADH的氧化速度使用反射光光度法进行测定。反射强度的变化率与酶的活性成准比. ALT 丙氨酸 + α- 酮戊二酸 丙酮酸 +谷氨酸 5- 磷酸吡哆醛 丙酮酸 + NADH + H+ LDH 乳酸 + NAD+. 标本种类：血浆。 采集要求：避免溶血；样品采集后3天内离心标本，吸出血浆。 所需的仪器: 5.1 名称：全自动干式生化仪； 5.2 型号： Vitros250 5.3 生产厂商： 强生公司。 所需的试剂： 6.1 品牌：美国强生 6.2 干片成分： 反应成分：乳酸脱氢酶、L-丙氨酸、α-酮戊二酸钠、已还原的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、5－磷酸钠吡哆醛。 其他成分：色素、粘合剂、缓冲液、表面活性剂、交联剂和稳定剂。 6.3货号：1537513 6.4 包装规格：300片/盒 6.5在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态，18-28℃，因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。达到室温后应在24小时内装载完,装载的干片在仪器系统开启的状态下可保存4周。 批号 8.2.2取缓冲液3ml加入相对应的粉剂小瓶中，混匀，室温放置30分钟。 8.2.3吸取250ul校准品置于测试杯里，按照仪器校准程序进行校准。具体操作步骤详见《强生VITROS全自动干式生化分析仪操作指导书》。 8.2.4 余下校准品分装至小离心管中，置于-10℃保存一月，每次使用一支。 8.2.5 校准通过后，仪器会自动提示校准通过；若校准未通过，查找原因解决后再执行校准程序，直至校准通过。 质控品： 9.1名称：强生VITROS质控品 9.2来源：美国强生 质量控制程序的操作步骤: 10.1质控周期：每天对ALT进行质量控制操作。 10.2操作步骤 10.2.1冷冻柜拿出质控1#和2#粉剂、缓冲液各一瓶，置室温溶解。 10.2.2 取缓冲液3ml加入相对应的质控粉剂小瓶中，混匀，室温放置30分钟。 10.2.3质控1#和2#各吸取250ul置于测试杯里，与标本一同检测。 10.2.4余下质控品分装至小离心管中，置于-10℃保存一月，每次使用一支。 质控结果分析: 质控结果由V250生化分析仪传输到联网计算机中。 检测结束后及时将质控数据输入上海市临床检验中心质控系统后，电脑自动绘出质控图。 室内质控品的测定值应在相应试剂组允许的靶值范围内，遵循Westgard规则进行判断是否有失控。 标本检测操作步骤：具体操作步骤详见《强生VITROS全自动干式生化分析仪操作指导书》。 干扰: 13.1. ALT测定中存在着两个副反应 13.1.1. 血清中存在的游离α-酮酸（如丙酮酸）能消耗NADH： 丙酮酸 + NADH + H+ LDH 乳酸 + NAD+. 13.1.2. 血清中谷氨脱氢酶（GLDH）增高时，在有氨离子存在下，亦能消耗NADH： GLDH α- 酮戊二酸 + NADH + NH4+ L-谷氨酸 + NAD+ + H2O 上述副反应都能消耗NADH，使340nm处吸光度下降值（-△A/min）增加，使测定结果偏高。因此，在单试剂方法中必须要有足量的LDH（2 000U/L，Scandinavia法；1 200U/L，IFCC法），才能保证α-酮酸（尤当遇到丙酮酸含量升高的标本）引起的副反应在规定的延滞期内进行完毕。这样，LDH含量高，试剂成本提高。 13.2. 正常新生儿ALT水平比成年人约高2倍，出生后约3个月降至成年人的水平。新生儿，尤其未成熟儿，肝细胞膜通透性比较大，ALT从肝细胞渗入血浆较多，使血清ALT水平升高。 13.3. 血清不宜反复冻融，以免影响酶活性。血清置4℃1周，酶活性无显著变化。在常规ALT测定中，不推荐冰冻保存血清标本。 13.4. 红细胞内ALT含量为血清中3 ～ 5倍，应避免标本溶血。尿液中