微生物实验实验一培养基的配制和灭菌法).ppt

微生物学实验 本学期《农业微生物学》实验课共开设6个实验项目。 培养基的配制及灭菌法； 微生物测数技术； 微生物菌落形态观察、纯种分离及接种技术； 细菌的染色技术及基本形态、特殊构造观察； 放线菌、霉菌形态观察； 化学药剂对微生物的作用及拮抗微生物的筛选。 实验课课程安排 一个连续的大实验“环境微生物分离、纯化、观察及功能检测” 实验课考核办法 实验成绩 （占课程总成绩30%） 平时成绩 技能考核：操作考试 实验报告:按时交。 操作： 实验室规则和要求 实验一 培养基的配制和灭菌法 培养基：按照微生物生长发育的需求，将不同组合的营养物质调制成的营养基质。 一、实验原理 营养成分 水分 碳源 氮源 无机盐 生长因子 不同微生物的生长对于培养基有不同的要求 （细菌、放线菌：pH值中性至偏碱性；真菌喜好酸性） 天然培养基: 用生物的组织、器官以及提取物配制成的培养基。通常其化学成分难以确切知道。 合成培养基：用成分和数量已知的化学试剂配制而成。成分明确，重复性好。 半合成培养基: 部分天然材料和部分纯化学试剂配制而成。 培养基的种类 1. 按照培养基成分不同分为： 培养基的种类 2. 按照培养基形态的不同分为： 液体培养基：将配方中的成分溶解而成，不含凝固剂。 固体培养基：加入琼脂凝固剂1%-2%. 半固体培养基：加入琼脂凝固剂0.2%-0.5%。 培养基凝固剂 琼脂：常用；海藻多糖，不易被分解利用；透明度 好；凝固点：45 ℃，溶解点：96 ℃； 硅胶： 基础培养基: 选择培养基： 加富培养基 鉴别培养基 培养基的种类 3. 按照培养基用途不同分为： 培养基配制流程 原料称量 加热溶解、搅拌 定容 调节pH值 过滤澄清 分装 塞棉塞和包扎、注明培养基名称、班级、组 高压蒸汽灭菌 冷藏、待用 （配制1000mL用量） 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 10～15g 水 1000mL pH 7.2～7.4 （配制1000mL用量） 可溶性淀粉 20g KNO3 1.0g NaCl 0.5g K2HPO4 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 10～15g 水 1000mL pH 7.4～7.6 牛肉膏蛋白胨培养基 高氏1号培养基 马丁氏培养基 （配制1000mL用量） 葡萄糖 10g 蛋白胨 5.0g KH2PO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.5g 孟加拉红（1/300) 10mL 琼脂 10～15g 水 1000mL pH 自然 马丁氏培养基 培养基配方 二、实验内容 1 以小组为单位，分别配制牛肉膏蛋白胨培养基（第一组、第四组）、高氏一号培养基（第二组）、马丁氏培养基（第三组）各400mL。 2 3 4 每组制备无菌水：1个90mL 三角瓶无菌水、6只9mL试管无菌水。 每人包1mL移液管一支。 学习灭菌、消毒方法；操作高压蒸汽灭菌。 灭菌和消毒技术（P16) 灭菌：用物理或化学的方法杀死物体上全部微生物的过程。 消毒：用物理或化学的方法杀死物体上大部分微生物(特别是 病原微生物)，尚存少数无害微生物。 灭菌（消毒）技术 过滤除菌 辐射杀菌 高温灭菌 化学药剂灭菌  常用灭菌方法 干热灭菌 时间：1-2小时 温度：160-170℃ 压力：常压 仪器：电烘箱 高压蒸汽灭菌 时间：15-30分钟 温度：121℃ 压力: 0.1MPa(1.05kg/cm2) 仪器：高压蒸汽灭菌锅 巴氏消毒法 时间：15-30分钟 温度：60-85℃ 压力：常压 仪器：蒸锅  实验作业： 《微生物实验报告册》P2：1-3