天然药物化学第五章解析.ppt

教学目标 1、掌握薄层色谱法和高效液相色谱法。 2、掌握薄层色谱法和高效液相色谱法在天然药物化学中的应用。 3、掌握中药有效成分结构鉴定方法。 第一节薄层色谱法 一、定义： 是把固定相均匀地涂在一块玻璃板或塑料板上，形成一定厚度的薄层并使其具有一定的活性，在此薄层上进行色谱分离，这种方法称为薄层色谱。 二、特点 简单，易行，价格低廉 分析快速 在色谱板上检测样品，不会丢失组分 可用多种显色剂 可在同一块板上同时分离多个样品 所需样品量少 灵敏度高 三、基本原理 利用作为固定相的吸附剂对混合物中各种成分吸附能力的大小的不同，使各成分得到相互分离。 四、固定相（吸附剂） 硅胶H（不含粘合剂） 硅胶Q（含有15～35％石膏作为粘合剂） ——HF254（含在254nm波长紫外光下显荧光的无机荧光剂） ——HF254+365nm 五、制备与分析 铺层 点样 展开 显色 对于样品的酸碱性，如果试样与吸附剂一为酸性一为碱性，则有可能会发生酸碱反应而产生不可逆吸附，使分离过程难以进行。故吸附剂与的酸碱性应与试样保持一致。硅胶稍带酸性，氧化铝稍带碱性，可以将二者１：１混合制成中性的吸附剂，或用稀碱液制备薄层使硅胶薄层成碱性，或用稀酸液制备薄层使氧化铝薄层成酸性．或在展开剂加酸碱来调其酸碱性． 溶剂、吸附剂的选择规律 记住一个图 六、应用 1、有机合成 2、控制中药制剂的质量 选择与确定对照品 制备供试液 对色谱分离条件进行优选 举例说明 第二节 高效液相色谱法 高压液相、高速液相色谱法（特点：高 压、高速、高灵敏度） 为了解决固定液的流失，研制了化学键合固定相 将十八烷基—C18H37 高压泵 进样器和色谱柱 检测器 制备：尽可能多的获得样品纯组分 分析型色谱柱：（内径4～5mm，长25～50cm） 半制备：（内径9～10mm，长25～50cm） 制备柱: （内径20～22mm，长25cm） 制备柱上样量＝分析柱上样量 dc·2:制备柱内径 L2：制备柱长 dc·1:分析柱内径 L1：分析柱长 第三节 天然药物化学成分结构测定的一般步骤： 一、测定程序 纯度(可以用薄层，但必须是三种不同的展开系统来证明） 分子式的测定（元素分析、高分辨质谱） 化合物功能基和分子骨架的推定（紫外光谱UI、红外光谱IR、质谱MS、核磁共振谱NMR） 化合物结构式的确定（还可测定试样的旋光谱以确定化合物的立体化学结构，采用X射线研究化合物的精细结构，如键长、键角、和绝对构型） 二、测定方法 确定分子式并计算不饱和度 公式：u=Ⅳ-Ⅰ/2+Ⅲ/2+1(u表示分子的不饱和度；Ⅰ表示一价原子的数目；Ⅲ表示三价原子的数目； Ⅳ表示四价原子的数目） 例如分子式C30H48O3，则该化合物的不饱和度为30。 质谱 2、紫外—可见光谱 是利用不同的波长（常在200~700nm)的紫外及可见光为光源，依次照射一定浓度的试样溶液，化合物分子因吸收紫外及可见光而产生电子跃迁，在不同的波长处测量物质的吸收度，按吸收强度和吸收波长作图所得的吸收光谱。 主要提供分子中有无共轭系统及共轭系统的长短；有无醛、酮、酸、酯）。不是整个分子的特征。 3、红外光谱 通常是采用2.5~15μm(4000~667cm-1)范围内不同波长的光波为光源，依次照射试样，化合物分子中化学键的振动与转动，将在此区域内引起吸收，记录试样的吸收曲线所的吸收光谱。 提供的信息主要是分子中具有哪些特定的官能团。对于已知化合物可与标准图谱对照，以特征区、指纹区与标准图谱对照。 特征区（ 4000~1250cm-1)，对官能团的定性具有决定性的意义。 O-H、N-H伸缩振动区（ 3750~3000cm-1)；C-H伸缩振动区（ 3300~2700cm-1)；三键对称伸缩区是（ 2400~2100cm-1)；羰基的伸缩振动区是（ 1900~1650cm-1)；双键的对称伸缩振动区是（ 1690~1600cm-1)；C-H弯曲振动区（ 1000~650cm-1)。 指纹区主要是由原子或原子团间的键角变化所引起。此区间的吸收谱线细密、重叠复杂、且大多吸收强度较小，谱带特征性差，难以解析，但分子结构的细微变化均能在此区域明显的反应出来，使每一化合物均有各自不同的吸收曲线，如同指纹。 4、质谱 化合物分子经电子流冲击或其它手段打掉一个电子后，形成正电荷离子，然后裂解成一系列的碎片离子，这些阳离子在电场和磁场综合作用下，按照离子质量大小依次排列而成的图谱。 M--e→M+ 横坐标是荷质比