网织红细胞检测进展及其临床应用分析.ppt

谢谢！ 网织红细胞检测进展及其临床应用 概述 网织红细胞(reticulocyte，Ret)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞。网织红细胞是有核红细胞刚刚失去核的阶段，仍属未完全成熟的红细胞，浆内尚残留有嗜碱性RNA，经碱性染料（如天青B、煌焦油蓝或新亚甲蓝）活体染色后，在包体内可见蓝色点状或网状结构，故名网织红细胞。 概述 红细胞在骨髓中生成，至发育为成熟红细胞，经历了不同阶段：干细胞、原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞、网织红细胞，最后发育为成熟红细胞。随着细胞的成熟，RNA含量逐渐减低，至细胞完全成熟后消失或接近消失，即红细胞中网线状结构越多，表示细胞越幼稚。ICSH将Ret分为4型：Ⅰ型（丝球型）、Ⅱ型（花冠型或网型）、Ⅲ型（破网型）、Ⅳ型（颗粒型）。正常生理状态下，Ⅰ型只存在于骨髓，Ⅱ型在外周血也很难见到，Ⅲ型仅有少量释放到外周血，因此外周血网织红细胞计数时以Ⅳ型为主。 概述 概述 Ret是红细胞成熟过程中的一个重要阶段，是判断骨髓红系造血情况和疗效观察的重要指标。其检测方法既有传统的显微镜目测法，又有现代化的仪器计数法(如流式细胞仪、网织红细胞计数仪及血细胞分析仪)。 网织红细胞检测进展 1.手工法 2.血细胞分析仪法 3.流式细胞仪法和专用网织红细胞分析仪 1.手工法 手工法分玻片法和试管法。由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸发，染色时间偏短，因此结果偏低；试管法容易掌握，重复性较好，必要时还可以从混合血液中再取标本重新涂片复查。试管法被列为手工法Ret计数的参考方法。按卫生部《全国临床检验操作规程》第2版，采用试管法用煌焦油蓝染液对血液标本进行红细胞活体染色、制片，选择细胞分布较均匀、厚薄适中的体尾交界处，每份标本油镜下参照陈宝梁的建议 ，即Ret6 %，计数红细胞1000个；3%～ 5 %计数红细胞2000个；1 %～2% 应计数红细胞4000个；小于1 %计数红细胞10000个。 1.手工法 传统的显微镜计数方法操作较繁琐、影响结果的因素较多。近年来，国内开始使用国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Miller窥盘进行计数，规范了计算区域，减少了实验误差，使结果准确性有所提高(卫生部临检中心建议，CV控制在15 %之内)。Miller窥盘法是将一种光学圆片状Miller窥盘安放在显微镜目镜中，窥盘中有面积比例为1：9的2个正方形计数方格，只需计数1／9小方格内的红细胞即可准确估量出整个大方格内的红细胞数量。 卫生部临床检验中心控制Ret计数CV≤15%需镜检的RBC数目 Ret(%) 计数Miller窥盘小方格RBC 相当于缩视野法计数RBC数目 1-2 444 4000 3-5 222 2000 6 111 1000 1.手工法 国内很多学者在此基础上设计了几种改良的Ret计数窥盘。张时民等设计了一种双环式结构的Ret计数窥盘，该盘的特点是小圆环和大圆环面积之比为1：10，小圆环为计数红细胞数量，大圆环为计数Ret数量。其圆形结构更加适合于人们观察和计数显微镜下细胞数量的习惯，而且此比例更加易于计算红细胞和Ret的比值。 1.手工法 陈高远则在这两种窥盘的基础上设计了改良式Miller窥盘，采用双正方形结构，小方格和大方格之比也达到1：10，只是将红细胞计数区域位移至中心部位，以方便红细胞数量的计数。 1.手工法 刘志贤设计了一种新的Ret计数窥盘即180×4扇形Ret计数窥盘：圆形直径为19 mm，圆心角∠ AOB=∠COD=∠EOF=∠ GOH=180。弧AB=CD=EF=GH=180。计算公式为：Ret %=整个计数区域内的Ret数／(4个小扇面区域内的RBC总数×5)×100％ 。这种新型Ret计数窥盘4个扇形区域均匀分布在整个视野的4个方向，4个扇形面积之和是整个圆形面积的1／5，因此在理论上基本解决了红细胞分布不均匀引起的问题，降低了系统误差和随机误差 。 手工法网织红细胞活体染色染料评价 染料 评价 新亚甲蓝 WHO推荐使用，对RNA着色强，试剂稳定，Hb几乎不着色 煌焦油蓝 溶解度低，染料沉渣易附着红细胞表面，影响辨认；易受变性珠蛋白小体、HbH包涵体干扰 中性红 染液浓度低、背景清晰、网织颗粒与红细胞对比鲜明；不受变性珠蛋白小体、HbH包涵体干扰 2.血细胞分析仪