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第二章 色谱分析法 高效液相色谱分析 3.1 高效液相色谱法的特点 高压：150～350×105Pa 高速 高效：气相色谱n约为2000塔板/米 液相色谱n约为30000塔板/米 高灵敏度：紫外检测器：10-9g 荧光检测器：10-11g 高效液相色谱法对比气相色谱法的优点 对于高沸点、热稳定性差，相对分子质量大（＞400）的有机物（占有机物总数的75～80%）原则上都可分离 流动相选择余地广 样品的回收比较容易 高效液相色谱法对比气相色谱法的缺点 缺少通用型检测器 “柱外效应”对柱效率及色谱分离影响较大 流动相价格较高 流动相有毒 3.2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 色谱分离的基本理论 （P10） 塔板理论 速率理论 涡流扩散项He He = 2λdp 纵向扩散项Hd 影响峰扩散的主要物理性质 传质阻力项 固定相传质阻力项 流动相传质阻力项 对液液分配色谱法，可使用薄的固定相层；而对吸附、排阻和离子交换色谱法，则可使用小的颗粒填料来解决。 使用具有扩散系数大的液相固定液，可改善传质。 减小流动相流速，亦可改善传质。不过这些都是与分子扩散作用相矛盾的，而后者还会增长分析时间。 流动相传质阻力项 流动的流动相中的传质阻力项Hm 滞留的流动相中的传质阻力项Hsm 流动的流动相中的传质阻力项Hm 式中Cm是一常数，是容量因子k的函数，其值取决于柱直径、形状和填充的填料结构。当柱填料规则排布并紧密填充时，Cm降低。 滞留的流动相中的传质阻力项Hsm 式中Csm是一常数，它与颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数以及容量因子有关。 Giddings方程 H-u曲线图 液相色谱的H-u曲线 LC和GC的H—μ图 固定相粒度大小对板高的影响 柱外效应 柱前峰展宽主要由进样所引起。液相色谱法的进样方式，由于进样器的死体积，以及进样时液流扰动引起的扩散造成了色谱峰的不对称和展宽。若将试样直接注入到色谱柱顶端填料上的中心点，或注入到填料中心之内1～2mm处，则可减少试样在柱前的扩散，峰的不对称性得到改善，柱效显著提高。 柱后展宽主要由接管、检测器流通池体积所引起。由于分子在液体中有较低的扩散系数，因此在液相色谱中，这个因素要比气相色谱法中更为显著。为此，连接管的体积、检测器的死体积应尽可能地小。 3.3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 液-液分配色谱法（liquid-liquid partion chromatography）及化学键合相色谱（chemially bonded phase chromatography） 正相液-液色谱法（normal phase liquid chromatography）：一般为了避免固定液的流失，对于亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性。 反相液-液色谱法（revers phase liquid chromatography）：流动相的极性大于固定液的极性 ，出峰顺序正好与正相液-液色谱相反。 液-固色谱法〔 或称液-固吸附色谱法（liquid-sold adsorption chromatography）〕 其作用机制是溶质分子（ X ）和溶剂分子（ S ）对吸附剂活性表面的竞争吸附，可用下式表示： 这种竞争吸附达到平衡时，可用下式表示: 离子交换色谱法（ion-exchange chromatography） 离子对色谱法（ion pair chromatography） 离子色谱法（ion chromatography,IC) 在阴离子分析中，试样通过阴离子交换树脂时，流动相中待测阴离子（以Br-为例）与树脂上的 OH-离子交换。洗脱反应则为交换反应的逆过程: 直接洗脱： Br-和OH- 使分离柱流出的洗脱液通过填充有高容量H+型阳离子交换树脂的抑制柱，则在抑制柱上将发生两个非常重要的交换反应： 空间排阻色谱法（steric exclusion chrormatography) 3.4.1 液-液色谱法及离子对色谱法固定相 全多孔型担体（porous micro beads support）：氧化硅、氧化铝、硅藻土制成的直径为100μm左右的全多孔型担体。目前粒度为5～10μm的全多孔微粒担体是使用最广泛的高效填料。 表层多孔型担体，又称薄壳微珠担体（pellicuar micro