QSD 012污水及污泥中蛔虫卵的检测方法2..doc

污水及污泥中蛔虫卵的检测方法 ——集卵法 批 准 人： 批准日期：2002年6月6日 生效日期：2002年7月6日 有效版本：第 1 版 第 0 次修订 页 次：第 1 页 共 10 页 受控状态： 发放编号： 1 方法原理 本法总的原则是利用碱性溶液与样品充分混合，分离蛔虫卵，然后利用比重的不同，将分散在样品中的蛔虫卵集中起来，再进行检查并计数。所采用的方法一般有二种类型（因蛔虫卵的比重在1.10~1.16之间）。其一是飘浮法：用比重大的饱和氯化钠溶液（比重1.18）—0.80um)； 2.5 抽滤器； 2.6 大型载玻(4x7.5cm)，等。 3 主要试剂 3.1 饱和氯化钠溶液； 3.2 50%甘油； 3.3 5%氢氧化钠等。 4 方法步骤 4.1 飘浮法： 4.1.1 分离：称取5-10ｇ50ml清洁铜离心管或塑料离心管中，注入5%氢氧化钠溶液25-30ml，另加玻璃珠10粒，用适当大小的橡皮塞子紧塞管口，置电动振荡机上，振荡10-15min，每分钟200-300次，静置15-30min后，再行振荡，如此重复3-4次，使样品为碱性溶液所浸透，加上玻璃珠的撞击和摩擦，则混合液中的蛔虫卵，不再被粘着在一起。 4.1.2 飘浮：从振荡机上取下离心管，揭去橡皮塞子，用滴管吸取清水，将附着在皮塞上和管口内壁的泥状物，冲入管中，以免一小部分卵的漏检，而后再在离心机上离心 3-5min，每分钟2000-2500转，倒去多余的氢氧化钠溶液，水洗一次，即加清水将沉淀物搅浑后，离心，倒去上面的脏水。随后加入少量饱和氯化钠溶液，用玻璃棒搅成糊状，添加饱和氯化钠溶液，随加随搅，直加到离管口约1cm为止，此时将附在玻棒上的混合液也用一两滴饱和氯化钠溶液，冲入管中，离心3-5min，每分钟2000-2500转，由于蛔虫卵的比重小于饱和氯化钠溶液的比重，因此经离心后，管中的蛔虫卵，就会飘浮在氯化钠溶液的表面。 4.1.3 移置液膜，用直径小于1cm的金属丝圈，不断将表层液膜移于盛用半杯清水的小烧杯中，约30次后，再次搅拌和离心，适当增加一些饱和氯化钠溶液，如此反复操作3-4次，直到液膜涂片未查见虫卵为止。 4.1.4 抽滤：将烧杯中含卵混悬液，通过漏斗，抽滤于直径35mm，无裂纹和孔眼的微孔滤膜（2.4）上,混合悬液中的蛔虫卵,全部阻留在微孔滤膜上，有时由于样品中蛔虫卵数量过多，浑浊度大，不易为一张滤膜过滤时，则可另添一或二张滤膜，再抽滤。 4.1.5 镜检：抽滤完毕，立即用弯头小镊子，将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，平铺于大型载物玻璃片上(2.6)，趁 湿在低倍显微镜下直接检查，最好滴加两滴50%甘油溶液，这样，蛔虫卵在比较透明而无气泡的视野中，便于观察和计数。 4.2 沉淀法： 4.2.1 水洗：称取100g(或100ml)样品，放在500ml三角瓶中，加入5%氢氧化钠溶液100-150ml和三四十粒玻璃珠，塞以橡皮塞，浸泡半小时后，振摇3-4min，将上面的液体，倒入大烧杯中，再加等量清水于三角烧杯中，浸洗三、四次，直到洗出液透明为止。 4.2.2 过滤并用水洗沉淀：将前后收集的洗液，用1-2层纱布过滤于1000ml锥形量杯中，静置半小时至一小时后，倒去上层液体，如此，约半小时换水一次，直至上层水澄清为止。 4.2.3 测定体积：用虹吸管慢慢吸去沉淀上面的液体，将沉淀物倒入刻度量筒中，测量沉淀物的容积。 4.2.4 镜检：将沉淀物搅匀，迅速用1ml玻璃吸管吸取0.05和0.1ml于载玻片，盖以盖玻片,在低倍镜下检查并计算出总数。 5 计算结果 5.1 用饱和氯化钠溶液离心飘浮法时，5—20g（或ml）样品中的蛔虫卵，高度集中在滤膜上，在显微镜下计数时容易混乱，因此最好能在显微镜的目镜筒内，装上一枚目镜计数网，利用移动尺有规律的移动，逐渐数完整个滤膜上的全部蛔虫卵数。 5.2 在用水洗沉淀法时，需要准确测定沉淀物的容积，在用玻璃吸管吸取沉淀以供镜检时，必须搅拌均匀而后取样，而且需要观察若干次，而后取其平均数，从而计算1ml沉淀物的虫卵数，最后乘以沉淀总容积数，即是100g（或ml）原始样品的虫卵数。 6 蛔虫卵生活力测定法 6.1 直接镜检法：是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形态，以鉴别其死活。首先是鉴别受精卵和未受精卵，其次是鉴别有生活力和失去生活力（变性卵）的受精卵和含有幼虫卵的形态。有关形态鉴别要点如下： 6.1.1 未受精蛔虫卵的形态： 多为椭圆形，有时呈三菱形或不规则形，大小平均为80-98×40-60um，一般为黄褐色，有时蛋白质发育不全，有时完全失去蛋白质壳，