表面等离子共振的原理及在生物医学中的应用..doc

表面等离子共振的原理及在生物医学中的应用 精神卫生研究所 张瀚迪 学号 摘要：表面等离子共振技术是近年来迅速发展起来的用于分析生物分子相互作用的一项技术，它利用全反射时入射光可以和金属表面的等离子发生共振的原理，探测生物分子之间是否发生作用以及反应的动力学参数。该技术目前已广泛应用于免疫学、蛋白质组学、药物筛选、蛋白质与核酸相互作用等各个领域，并获得了许多用其它方法无法得到的动力学数据。 导言：表面等离子共振技术是一项用于分析生物大分子之间的相互作用的技术，它可以定性的判断两分子之间是否有相互作用，比较一种分子与其他几种分子之间相互作用的强弱，也可以实时定量的测定分子间相互作用的亲和力参数（平衡常数）和动力学参数（速率常数），甚至热力学参数（反应的焓）。该技术是利用了物理光学的原理（下文详述），在研究两分子相互作用时，将一种分子固定在传感片表面，而另一种分子的溶液流过其表面，两种分子的结合会使传感片表面的折射率改变，因此检测两分子间的相互作用。1983年，瑞典LINKOPING理工学院应用物理实验室Liedberg等人首先把它用于IgG与其抗原相互作用的检测[1]，并由BIAcore公司开发出SPR传感器。此后SPR传感器的研究与改进迅速发展，其在生物医学中的应用也日益广泛。 表面等离子共振技术的基本物理光学原理：如果光波从光密介质（折射率大）射向光疏介质（折射率小），比如由玻璃射向空气，且入射角大于临界角时，没有折射光产生，入射光全部反射回去，这一现象称为全反射。全反射时光波在两介质分界面的行为是什么样的呢？深入研究指出，全反射时光波将透入第二介质（光疏介质）很薄的一层表面（深度约为光波的波长），并沿界面流动约半个波长再返回第一介质（光密介质）。透入第二介质的光波称为倏逝波。如Fig 1 所示。 倏逝波是一个沿x方向传播的振幅在z方向（垂直于两介质界面的方向）按指数衰减的波。倏逝波最后仍返回第一介质，总的来说光的能量没有进入第二介质。 在两介质的界面镀上一层很薄的金属薄膜，薄膜厚度在倏逝波进入第二介质深度之内。当一束单频线偏振光以大于全反射临界角的某一角度入射时，如果其频率与金属表面振荡的自由电子（即等离子）频率一致，则金属表面的等离子就吸收入射光的能量发生共振，这一现象就是表面等离子共振（surface plasmon resonance, SPR），此时的入射角称为共振角。激发表面等离子共振的实质在于光波以倏逝波的形式将能量转移成表面等离子共振波，这时，反射光的强度和相位均发生剧烈变化[2]。如 Fig 2所示。 Fig 2. 入射光（incident light）以入射角 θ 照 SPR 传感器的工作原理： 根据这一原理研制了 SPR 传感器，其工作原理如 Fig3 所示。根 Fig 3 典型的 SPR 装置图。被分 析物——“配体”溶液流过固定 有‘受体’的传感片表面，若发 生作用而相互结合则会引起表 面物质质量改变，而折射率与质 在生物医学研究中适合应用 SPR 技术的工作有以下几方面： 1、鉴定大分子 射到 玻璃（glass）与空气（air）的界面，发生全反射，并产生倏势波（evanescent wave）.玻璃表面镀了一层很薄的金，由于入射光与金膜的表面等离子（振荡的表面自由电子）的频率相匹配，因此发生共振，入射光能量被吸收，反射光能量降低，出现一吸收峰。 根据这一原理研制了 SPR 传感器，其工作原理如 Fig3 所示。根据检测原理，共振角的变化就反应了结合在传感片表面的物质质量的变化。因此通过分析共振角，我们就可以分析分子之间的相互作用了。在SPR中，共振角的单位规定为RU，即反应单位或共振单位，1RU=10-4度，根据测量的经验显示，当有1ng/mm2的蛋白质连接到表面时，约导致共振角增大1000RU。由于将分子直接固定到金膜表面很难达到有效的密度使检测信号足够强，因此发展了一种方法，即先在金表面铺一层100-200nm厚的葡聚糖基质，再将，两种反应分子中的一种作为“受体”固定在其表面，这样大大提高了“受体”的密度，但也带来一些不足，本文不详细讨论。 Fig 3 典型的 SPR 装置图。 被分 析物——“配体”溶液流过固定 有‘受体’的传感片表面，若发生作用而相互结合则会引起表 面物质质量改变，而折射率与质量成正比，所以折射率改变，欲保证SPR发生，共振角也得随折射率改变，改变大小与结合的“配体”质量成正比。反射光中的阴影表示有能量丢失，SPR仪器可以检测到这一变化，并给出传感图。 左图为共振角大小随传感片表面的分子质量改变而从Ⅰ移到Ⅱ；右图为实时监测共振角的变化，随时间延长，结合在表面的“配体”-“受体”复合物增多，共振角也随之