选修一2.3分解纤维素的微生物的分离分析.pptVIP

课题3 分解纤维素的微生物的分离 现在，我们都清醒地认识到，能源危机正在影响着我们每一个人的生活。国际油价不断攀升，导致物价随之上涨。为什么石油价格会持续上涨呢？ 现在，世界上的许多科学家正致力于生物燃料方面的研究。 目前，第一代生物燃料以食用作物为原料，主要包括玉米、大豆、甘蔗，用可食用作物制造生物燃料是最简单可行的，因为把这些可食用作物转化为燃料的技术是现成的。然而，第一代生物燃料并非长久之计，原因很简单：没有足够的耕地能够满足制造生物燃料的原料需求。 第二代生物燃料主要以纤维素为原料。 富含纤维素的原料有很多：木材废料（锯木屑 、木质建筑残片）、农业废弃物（各种植物秸秆）、杂草等。这些作物耕作成本低、量大，更关键的是，这些作物的种植生产不会干扰和危及粮食生产。这些作物大多数能够在不能用作农田的边际土地上快速生长。还有一些能够在被废水或者重金属污染的土壤中生长并净化土壤，如生长周期较短的灌木柳树。 一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶 1.纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 思考：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？ 纤维素能被土壤中某些微生物分解 利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。 2.纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 ①取二支20mL的试管 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②各加入一张滤纸条 ③各加入pH4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml 甲 乙 ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 本实验的自变量是纤维素酶的有无，自变量的操纵方法是：在一支试管中添加适量（1mL）的纤维素酶溶液，在另一支试管不添加纤维素酶，但需加入等量的缓冲液，不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH。 实验分析：本实验的实验变量是什么？是如何设置对照的？ ㈡.纤维素分解细菌的筛选： 1.方法： 刚果红染色法。 刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2.原理： 该方法可以通过颜色反应直接筛选。 3.优点： 二.实验设计与操作 ㈠.实验设计： 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 ①分布环境 1、土壤取样： 富含纤维素的环境中 由于生物适应一定的环境，环境对生物有选择作用，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对较高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。 ②为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？(旁栏思考) ③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 ④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。 2、选择培养 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 ①目的： 分析书本P29 纤维素分解菌的选择培养基 配方，回答问题。 答：用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照，或者将纤维素改为葡萄糖，菌落明显增多。 或接种不分解纤维素的细菌。 ②思考： A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 答：是液体培养基，原因是配方中无凝固剂 （琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 答：具有选择作用，本配方中以纤维素作为 唯一碳源，只有能分解纤维素的微生物可以 大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用。 称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d，至培养基变混浊。吸取一定的培养液（约5 mL），转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。 ③操作： 提示：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。 〖旁栏思考题〗为什