细胞工程实验指导书.docVIP

专业实验 实 验 指 导 书目 录 前 言 1 学生实验守则 2 实验一 MS培养基的配制 3 实验二 无菌操作及愈伤组织诱导技术 9 实验三 植物器官分化的调控 11 实验四 试管苗的驯化、移栽和管理 13 实验五 多倍体植株的诱导 15 学生实验守则一、 自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室内安静，注意环境卫生， 不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。二、 实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。三、 爱护实验仪器设备，厉行节约。仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。四、 实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。若需借用应办理借物手续。五、 注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。六、 实验结束，由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备，学生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。实验一 MS培养基的配制 一、实验目的 使学生了解植物组织培养MS培养基母液和注意事项；掌握完全培养基的配制及灭菌方法，为植物愈伤组织诱导实验做好准备。 二、实验原理 植物离体组织器官可在人工合成的培养基中生长分化。用于植物离体培养的培养基至少包括无机盐、糖类、其它有机化合物、生长调节剂，根据不同需要可添加其它附加成分。植物组织培养中常用MS培养基。已分装的培养基要经高压蒸汽灭菌。 配制母液时要用双重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采用化学纯或分析纯级，药品的称量及定容都要准确，各种药品先以少量蒸馏水使其充分溶解，然后按培养基上的排列顺序混合。 三、实验器具与药品①器材：电子天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱、移液枪、pH计、高压灭菌锅。 ②试剂：配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。 实验按每2个学生一组，每组分配制培养基母液及激素母液一套，50 mL量筒、1000 mL有刻度烧杯、吸球、电炉各1个，5 mL移液管9支，50mL三角瓶20个。四、实验内容与操作步骤 （一）MS培养基母液的配制 首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。 母液种类 成分 规定用量ml/L 扩大 倍数 称取量mg 母液定容体积 ml 配1LMS培养基吸取量ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 1900 1650 370 170 440 20 38000 33000 7400 3400 8800 1000 50 微量元素 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O H3BO3 KI Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 1000 22300 8600 6200 830 250 25 25 1000 1 铁盐 Na-EDTA FeSO4·7H2O 37.3 27.8 100 3730 2780 1000 10 维生素和氨基酸 烟酸 甘氨酸 Vit.B1 Vit.B6 肌醇 0.5 2.0 0.1 0.5 100 100 25 100 5 25 5000 1000 10 1.MS大量元素母液的配制 按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50ml。 2.MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g， ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g