细胞原理总结..doc

1细胞培养：从活的机体中取出组织或细胞，分散成单个细胞，模拟机体内的生长条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使其在体外环境中继续生长繁殖的过程，并维持其结构和功能的技术。 2净化工作间设计标准为万级 3消毒：杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽孢的方法，通常用化学的方法来达到消毒的作用，用于消毒的化学药物叫做消毒剂。 4灭菌：把物理上所有的微生物全部杀死的方法，通常用物理的方法来到达灭菌的目的。 5贴壁依赖型细胞分为4型：成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多型细胞型 6传代培养：体外生长的培养细胞受营养条件、生长空间等因素的限制，当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新培养液进行扩大培养的过程。 7细胞活力：活细胞占总细胞的百分比 8冻存和复苏的原则：慢冻快融 9细胞冻存常用保护剂为DMSO，它是一种渗透性保护剂 10细胞污染和检测方法：肉眼直接观察法、培养检查法、显微镜观察法、PCR检测 11支原体污染的处理：用MRA处理细胞、清洗纯化法、药物辅助加温处理、使用支原体特异性血清 12原代培养：从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分裂增殖和生长发育的能力 13实体组织形成细胞悬液的方法：机械分散法、消化分离法（上皮细胞和肝细胞）、贴块培养法（血管平滑肌细胞） 14悬浮细胞分离方法（淋巴细胞）：密度梯度离心 15原代细胞的纯化：自然纯化和人工纯化（酶消化法、反复贴壁法、培养及限定方法、流式分选） 16动物细胞大规模培养方式：分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养 17流式细胞术：高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或颗粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞进行快速多参数定性或定量检测和分选的一种细胞分析技术。 18流式细胞仪：以流式细胞术为理论基础，是集流体力学、激光技术、电子工程学、单克隆抗体技术、细胞荧光化学和计算机等学科知识为一体的高科技细胞分析仪。 19流式细胞仪特点：单个细胞分析、同时多参数分析、速度快（10000个/S）、统计学意义（提供细胞群体的均值和分布情况）、分选感兴趣的细胞 20流式细胞术对照的设置： 空白对照（自发荧光/本底荧光）：未染色细胞 同型/独特型对照：抗原抗体之间是否特异性结合，排除非特异结合 补偿对照：多色分析时做每种荧光素单独染色的细胞 阳性对照：确定操作过程的正确性 21荧光补偿：利用电子技术活计算机软件等方法将串入相邻荧光通道的信号加以扣除的技术 22流式细胞仪数据显示方式：单参数直方图、双参数二维点图、等高线图、密度图 23细胞增殖检测技术： 直接计数：优点：不需要特定的试剂和仪器、准确。缺点：不适合样品数量多的情况、不适合评估特定的亚群 胸腺嘧啶核苷掺入法（3H—TdR）：优点：敏感性高、客观性好、重复性好。缺点：但需要一定设备条件，存在放射性核素污染的问题 5溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）检测法：优点：不仅能用于体外实验，还能用于活体实验。缺点：Brdu需要变性DNA后才能与抗体结合，破坏DNA双链结构，影响其它染料结合染色，导致染色弥散，准确性降低等问题 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法：进入细胞后不可逆地与氨基结合偶联到细胞蛋白质上，当细胞分裂时，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞，其荧光强度是亲代的一半，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减。 MTT检测法：线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成紫色的水不溶性的甲瓒，并沉积在细胞中，死细胞无此功能，MTT结晶形成的量与细胞数和细胞活力呈正比 CCK8：优点：a使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂b快速检测c灵敏度很高d重复性优于MTT法e细胞毒性小f检测试剂无需预制，即开即用。缺点：a价格比较贵b CCK8试剂为淡红色，与含酚红的培养基颜色相近，容易漏加或多加 Ki67（增殖细胞核抗原）：核增殖标志物，无组织特异性，可靠、迅速反映增殖率 24细胞凋亡检测技术： 形态学检测：吉姆萨染色、瑞氏染色、Hoechst33342、Hoechst33258、DAPI Annexin V：凋亡细胞磷脂酰丝氨酸外翻到细胞膜外，Annexin V是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白 PI（碘化丙啶）染色：溴化乙锭的类似物，嵌入双链DNA后释放红色荧光，DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，能穿过破损的细胞膜而对核染色。 DNA Fragmentation：凋亡细胞DNA在核小体间发生有规律的断裂，出现180—200bp的DNA片段，坏死细胞DNA断裂为无特征的DNA片段，进行琼脂糖电泳可区分凋亡和坏死。 TUNEL（脱氧核糖核酸酶介导的缺口末端标记法）：细胞凋亡染色体DNA双