不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究.docVIP

不同产地桔梗的聚丙烯酰胺凝胶电泳指纹图谱鉴别研究 石俊英， ， ： ( PAGE)指纹图谱鉴别方法。方法 蛋白质( Pro) 、过氧化物酶同工酶( POD) 、酯酶同工酶( EST) PAGE 指纹图谱分析。结果 不同产地桔梗的Pro图谱差异极小； PODPAGE 与EST图谱在谱带分布及数量上均具有显著性差异， POD与EST指纹图谱可作为鉴别不同产地桔梗的有效方法。 关键词： ； ； ； ； [Platycodon grandif lorum ( Jacq) A.DC. ]的干燥根[ 1] ， ， ， 1991年国际种子检验协会将蛋白质电泳方法正式定为标准的品种鉴定方法， [ 2 ] 。蛋白质是植物基因表达的产物， ， ， [ 3-7] 。为了规范桔梗的栽培技术， ， ( Pro)、过氧化物酶( POD )和酯酶同工酶( EST)的聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE指纹图谱分析， 1 仪器、试剂与材料 1．1 仪器 DYY -稳流稳压电泳仪( 北京六一仪器厂) ； DYY28型电泳仪槽( 北京六一仪器厂)；EDAS290凝胶成像紫外分析仪(北京市新技术应用研究所) ； LGR16W 高速冷冻离心机(北京医用离心机厂) ； FA1104 ( 上海天平仪器厂) ； ( 1 400 r×m in-1 ) (浙江黄岩求精真空泵厂)。 1．2 试剂 三羟甲基氨基甲烷、丙烯酰胺、过硫酸铵、N,N -亚甲基双丙烯酰胺、甘氨酸、考马斯亮蓝R250、醋酸联苯胺、监牢兰、四甲基乙二胺、溴酚蓝等所用试剂均为分析纯。 1.3 实验材料 实验样品的产地、采收时间、生长年限等参见表1。经山东中医药大学药学院石俊英教授鉴定为桔梗[Platycodon grand if lorum ( Jacq. )A.DC. ]。 2 方法与结果 2．1 Pro图谱分析 2．1．1 电泳实验 样品制备、凝胶制备、电泳操作、染色与保存参照文献[ 5]进行。其中1年生的6个桔梗样品为A 组， 25个桔梗样品为B组， POD， ESTPAGE 电泳实验样品分组与此相同。 2．1．2 Pro图谱处理 将脱去底色的样品凝胶板通过凝胶成像紫外分析仪( e lectrophoresis documentat ion and ana lysis system ) 扫描成PAGE 指纹图谱并进行聚类分析， PAGE 电泳指纹图谱。各组Pro电泳图谱见图1。 2．2 POD图谱分析 2．2．1 电泳实验 样品制备、凝胶的制备、电泳操作、染色与保存参照文献[ 5] 进行。 2．2．2 POD图谱处理 操作同“2.2.1”。各组POD图谱见图2。 2．3 EST图谱分析 2．3．1 电泳实验 样品制备、凝胶的制备、电泳操作、染色与保存参照文献[ 5] 进行。 2．3．2 EST图谱处理 操作同“2.1.2”。各组EST图谱见图3。 3 讨 论 3．1 由图1~ 3中的Ⅰ可以看出不同产地桔梗的蛋白质PAGE指纹图谱差异极小， ， ， ， 8个不同产地桔梗样品为同一品种。另外， A，B Pro图谱， Pro指纹图谱一致， 1~ 3中的Ⅱ可以看出11个样品的相似度在95.24% ~ 100%之间， ， 100%。由此可见， ProPAGE 指纹图谱不能鉴别同一品种的桔梗药材。 3．2 同工酶是基因的直接产物， A， B POD，ESTPAGE指纹图谱中各个产地的桔梗药材所含过氧化物酶、酯酶均有所不同， POD， ESTPAGE 的指纹图谱来鉴别不同产地桔梗药材。 3．3 蛋白质、酶类都是植物遗传物质的直接表达产物。用Pro电泳指纹图谱可以有效的鉴别植物的品种， ， ， PODPAGE， ESTPAGE 指纹图谱又可以用来鉴别不同产地的药材。PAGE 方法具有快速准确、操作简便、稳定性和重现性好等优点， ， REFERENCES [ 1] Ch.P ( 2005 ) Vol (中国药典2005 年版一部) [ S] .2005：196 [ 2] WU M S， WANG S C， DA I JRApp licat ion of f ingerprin t ing techn ique in cu ltivar id ent if icat ion and pu rity test [ J] .J Agric Biotechnol(农业生物技术学报) ， 1998， 6( 1 )： 5156. [ 3] SH I JY， YU Y L， LU YA pp licat ion of m olecular b iological tech ique in app ais ing variet ies of L onicear ja rp onica [ J] . J Shandong Un