发酵工程-第二章教材.ppt

真菌的分离筛选：以啤酒酵母的分离为例 取发酵液少许以10倍稀释成10-1-10-7 稀释分离法 取0.1ml 加入固体培养基铺平皿（×2） ? ? 在麦芽汁固体培养基上，25℃培养48-72h 形态筛选 根据正常株特点进行挑选，接种斜面备用 ? ? 纯化，采用平板分离法进一步纯化，至少反复三次 ???? ①生成子囊孢子速度测定 ②发酵力测定 性能测定 ③热死温度测定 ④凝集力测定 ⑤双乙酰含量测定 二、发酵高产菌种选育 自然选育 常规育种(诱变育种) 细胞工程育种 基于代谢调节的育种技术 基因工程育种 蛋白质工程育种 代谢工程育种 菌种选育改良的具体目标 提高目标产物的产量 提高目标产物的纯度，减少副产物 改良菌种性状，改善发酵过程 改变生物合成途径，以获得高产的新产品 本章内容 一、菌种的来源 二、发酵高产菌种选育 三、菌种退化与保藏 四、微生物菌种扩大培养 一 最常用的工业微生物 细菌 醋杆菌属的醋化醋杆菌、弱氧化醋杆菌 乳酸杆菌 枯草杆菌 丙酮丁醇梭菌 大肠杆菌 谷氨酸棒状杆菌 第一节 菌种的来源 最常用的工业微生物 酵母菌 酿酒酵母 假丝酵母属 产朊假丝酵母 解脂假丝酵母 热带假丝酵母 毕赤酵母属、汉逊酵母属 最常用的工业微生物 霉菌 曲霉属 米曲霉 黑曲霉 青霉属 青霉菌：点青霉、产黄青霉 桔青霉 根霉属 德氏根霉 米根霉、小麦曲根霉 红曲霉属 紫红曲霉 最常用的工业微生物 放线菌 链霉菌属 小单孢菌属 地中海诺卡氏菌 米苏里游动放线菌 二、工业微生物来源 1、菌种保藏机构索取有关菌种 2、自然界采集 3、发酵制品中分离目的菌株 菌株分离：将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离筛选，进而得到所需微生物的过程。 1. 菌种选择的总趋势 野生菌→变异菌 自然选育→代谢控制育种 诱发基因突变→基因重组的定向育种 三、微生物菌种的选择性分离 2. 菌种选择的要求 （1）能在廉价原料制成的培养基上迅速生长，且生成的目的产物产量高、易于回收； （2）生长速度和反应速度较快，发酵周期较短； （3）培养条件易于控制； （4）抗噬菌体及杂菌污染的能力强； （5）菌种不易变异退化； （6）对放大设备的适应性强； （7）菌种不是病原菌，不产生任何有害的生物活性物质和毒素。 筛选包括以下几个方面 （1）把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物的鉴别； （2）从已知菌种和大自然中分离新菌株 ①寻找新的发酵产品的产生菌； ②寻找老产品的新的优良菌株。 选择筛选方法时必须考虑两个要点：（1）选择性（2）灵敏度。 分离筛选原理与技术 微生物分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、目的菌。 新种分离与筛选的步骤 调查研究（包括资料查阅） 试验方案设计 ? ? 含微生物样品的采集 （如何使样品中含所需微 生物的可能性大？） ? ? 样品预处理 （如何在后续的操作中使这种可 能性实现） ? ? 菌种分离 根据目的菌株及其产物特点分 ?? 选择性分离方法 随机分离方法 (定向筛选←选择压力) (用筛选方案- 检测系统进行间接分离） ?富集液体培养 固体培养基条件培养 (初筛) ? 菌种纯化 ? 复筛