优·免疫学应用.docVIP

第二篇 免疫学应用 1 血清学检测技术 2 细胞免疫反应检测 3 免疫学制备技术 4 免疫学防治 5 免疫学在畜牧业中的应用 第一章 血清学检测技术 1 免疫学检测的类型 （1）血清学检测：抗体或抗原 （2）细胞免疫反应检测：效应细胞的数量或功能 2、血清学反应的特点 （1）特异性：交叉反应程度于区分血清型或亚型。 （2）可逆性：是免疫亲和层析的依据之一。 （3）阶段性：标记抗体技术不存在阶段性。 （4）饱和性：抗体或抗原过多导致前带或后带现象 血清学交叉反应 作为研究物种进化关系的证据之一； 成为某些自身免疫病发生的原因； 是异源疫苗应用的理论基础； 可能给鉴别诊断、预防接种造成干扰或影响 的程度是区分两个菌株（毒株）血清型或血清亚型的重要依据： R＝ ×100％ r1＝异源血清效价1 / 同源血清效价1； r2＝异源血清效价2 / 同源血清效价2 抗原抗体反应的可逆性 本质：化学反应动态平衡 原理：抗原与抗体的非共价键结合 应用：免疫亲和纯化 两个概念： 亲和力（affinity）：单个结合位点间的作用 亲合力（avidity）：多个结合位点间的作用 参与抗原抗体反应的非共价键 影响抗原抗体反应的因素 1抗原抗体的性质和数量 （1）单价抗体与多价（二价）抗体 （2）单克隆抗体与多克隆抗体 2 电解质：常用生理盐水，但禽类需使用10倍浓度的NaCl溶液。 3 温度、pH、电泳、振荡、杂质等 格子学说（lattice theory）：形成网格状免疫复合物的第一个条件是抗原抗体必须至少为二价 格子学说（lattice theory）：形成网格状免疫复合物的第二个条件是抗原抗体的比例适当 血清学检测方法的类型 1、能产生肉眼直接可见反应的： 包括凝集反应和沉淀反应。 2、不能直接产生可见反应的： 包括补体参与的反应、中和试验和各种标记抗体技术 （荧光抗体技术、酶标抗体技术、胶体金标记抗体技术和放射免疫分析）。 试验方法的特异性和灵敏性 特异性（specificity）是指用某试验检查非患者时出现阴性结果的可能性。 特异性＝真阴性/（真阴性+假阳性）。 敏感性（sensitivity）是指用该试验检查患者出现阳性结果的可能性。 灵敏性=真阳性/（真阳性+假阴性）。 患者（阳性）与非患者（阴性）通常是用一种公认可靠的方法即“金标准”（gold standard）方法确定出来的。 各种免疫分析方法的灵敏度 沉淀反应（Precipitation Reactions） 可溶性抗原与相应抗体结合，自发形成肉眼可见的不溶性白色沉淀物 。 液相法：即玻璃管法如Ascoli氏反应 固相法：即凝胶平板法（1%~1.5%琼脂） （1）琼脂扩散：单向或双向 （2）免疫电泳：电泳＋双向 （3）火箭免疫电泳：电泳＋单向 （4）对流免疫电泳：电泳＋双向 （5）免疫沉淀技术 ：沉淀＋电泳 放射型单向免疫扩散（Radial Single Immunodiffusion） 双向免疫扩散（Double Immunodiffusion） 双向免疫扩散的基本反应形式 免疫电泳（immunoelectrophoresis） （单向）火箭免疫电泳 随电泳过程形成一个动态的火箭样沉淀线。 免疫（共）沉淀技术 放射免疫沉淀技术 （1）放射标记抗原 （2）加入抗体及固相化的抗体结合蛋白（如Sepharose-SPA）沉淀抗原 （3）离心获免疫复合物 （4）SDS或双相电泳 （5）X光胶片显影 常规免疫沉淀技术 （1）未标记抗原 （2）加入抗体及固相化的抗体结合蛋白（如Sepharose-SPA）沉淀抗原 （3）离心获免疫复合物 （4）SDS或双相电泳 （5）免疫转印分析 凝集反应（Agglutination Reactions） 参与凝集反应的抗原为颗粒性抗原（particulate antigen），如细菌、细胞或其他颗粒化抗原，反应产物呈肉眼可见的团块状或絮状。 直接凝集反应：ABO血型鉴定 间接凝集反应：红细胞、活性炭、乳胶 间接血凝抑制反应：Ab+Ag?+Ag-SRBC 抗球蛋白试验（Coombs试验） 协同凝集反应：Staphylococcus aureus Direct agglutination reactions ABO血型鉴定 布氏杆菌病（Wright test） 沙门氏菌病/伤寒（Widal test） 立克次氏体病（Weil-Felix test） 梅毒（Kahn test）：免疫荧光抗体凝集反应 霍乱、猪气喘病、猪丹毒：生长凝集试验 直接血凝反应（Direct Hemagglutination） using serial two-fo