植物DNA的提取与鉴定描述.pptVIP

实验试剂 CTAB提取缓冲液 洗涤缓冲液：(76%乙醇，10mmol/L乙酸铵共100ml：76mL无水乙醇，0.077g乙酸铵，加水到100mL) TE 缓冲液 (10mmol/L Tris-HCL （pH7.4），1mmol/L EDTA ) 氯仿-异戊醇（24 ：1） 70% 乙醇 液氮 实验器材 冷冻高速离心机 台式高速离心机 移液器 水浴锅[ 37~100℃ ] 陶瓷研钵 离心管 [ 50ml，有盖 ] 离心管 [ 5ml和1.5ml ] 小玻棒 [ 形状为弯成钩状的 ] 天平 ③酶的作用，细胞中普遍存在的核酸酶在细胞壁或膜遭到破坏时被释放出来，它会降解DNA分子。故须用酶的变性剂、抑制剂使之失活。操作过程最好在低温(0℃左右)下进行。 ,2，所有操作均须温和，避免剧烈震荡。 2.氯仿的作用？ 克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提，去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中） 3.异戊醇的作用？ 减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 圣诞快乐！ 植物DNA的提取与鉴定 第7组 组员：杨曼、杨芳、朱晨 植物DNA的提取与鉴定 实验目的： 掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法 掌握紫外光照射法鉴定DNA的原理和方法 实验内容： 采用CTAB法从植物叶片中提取DNA。 采用紫外光照射法鉴定DNA 实验原理 1.核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。 在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。 2.CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 （CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。 实验步骤 1 ，将10mLCTAB提取缓冲液加入50mL离心管中，置于60水浴中预热。 2 ，称取1.5g叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，尽快将叶片研碎至成粉末。 3 ，取1g粉末直接加入预热的CTAB分离缓冲液中，轻轻转动使之混匀。 4 ，将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二； 5，置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min后取出； 6，冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，充分混匀2~3 min 7，放入离心机中10000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中； 8， 10000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清液，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 s，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物； 9，10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上； 10, 60 s后，直立离心管，加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中； 11，放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解； 12，10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 ul 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min； 13，10000 rpm离心30 s后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）； 14，加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解 植物DNA的鉴定 紫外光照射法： 1．配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭（EB）溶液。 2．将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色。 3．将蜡纸放在紫外灯（260 nm）下照射（暗室中），可见橙红色的萤光（DNA的紫外吸收高峰在280 nm处）。 注意点 1，在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构： ①化学因素，核酸的结构在pH