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酶免疫测定（EIA） 分类 固相酶免疫测定 ELISA(酶联免疫吸附试验) 酶标志物——酶标记抗体或抗原 酶标记抗体或抗原 均相酶免疫测定 homogenous enzyme immunoassay 均相酶免疫测定 一、基本原理：标本中的抗原和ED标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不能再与EA结合。反应平衡后，剩余的ED标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活力，酶活力的大小与标本中抗原含量呈正比。 * 是否对结合的酶标志物进行分离 酶标志物、抗原、抗体、酶免疫复合物 是否使用固相支持物 异相酶免疫测定 均相酶免疫测定 酶免疫测定 固相相酶免疫测定 液相酶免疫测定 酶标志物、抗原、抗体、酶免疫复合物 酶标志物、抗原、抗体、酶免疫复合物 酶免疫技术的核心组成部分 酶结合物（conjugate） 酶标记物 通过化学反应或免 疫学反应，让酶与 抗体或抗原形成的 结合物 制备方法 过碘酸钠法（直接法） 常用于HRP标记抗体或抗原 戊二醛交联法 1.辣根过氧化物酶（HRP） 糖蛋白（主酶） 亚铁血红素（辅基） 主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心(ELISA中应用最为广泛的标记用酶 ) ELISA常用酶 2.碱性磷酸酶（AP） 辣根过氧化物酶HRP上的糖羟基可以被高碘酸钠（NaPIO4）激活生成醛基，这些醛基能通过Schiff碱与蛋白中的氨基偶联，紧接着还原Schiff碱形成稳定的偶联产物。这种HRP偶联标记方法已经被广泛认可，但是也存在一定的缺陷，特别是去除过量高碘酸钠（NaPIO4）的过程较为繁琐。需要注意的是，被高碘酸钠（NaPIO4）激活的HRP很不稳定，其酶活力会在几天内丢失 评价 用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，不用分离结合和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。 原理 最具代表性的两种技术 酶放大免疫测定技术EMIT enzyme-mutiplied immunoassay technique　　 克隆酶供体免疫分析 CEDIA cloned enzyme donor immunoassay 利用重组DNA技术制备β-半乳糖苷酶的两个片段：大片段称为酶受体（enzyme acceptor,EA），小片段称为酶供体（enzyme donor,ED），两个片段本身均不具酶活性，但结合在一起就具有酶活性，利用这一特性建立的均相酶免疫测定称为克隆酶供体免疫测定(CEDIA)。 CEDIA的反应模式为竞争法。 克隆酶供体免疫测定（cloned enzyme donor immunoassay,CEDIA） ：健康人O型血或绵羊静脉血，应2w内固化 * * *