显微摄影技术描述.ppt

实验报告的书写要求 实验原理/要求/目的 实验器材及准备 实验方案及操作步骤 实验数据记录和计算 实验结果及分析 个人用品： 帽子， 手套， 口罩， 拖鞋。 显微摄像技术 廖继东 电话：02085225841 E-MAIL:tliaojd@jnu.edu.cn 什么是显微摄像？ 显微摄像即利用摄像装置（传统相机、数码相机、专用CCD记录系统）拍摄显微镜视野中所观察到的物像。被拍摄物体的影像质量，取决于显微镜光学性能、摄像记录系统配制和操作水平。 内 容 光学显微镜的种类及结构特征 光学显微镜主要光学部件及性能 与显微摄像有关的基本光学概念 显微摄像系统的基本构成 显微摄像基本操作程序 影响显微成像质量的因素 光学显微镜的种类及结构特征 按照其光路结构、分辨模式可分为正置显微镜、倒置显微镜、体视镜、偏光镜等； 按照其照明光源性质可分为可见光（明视场、弱视场）、荧光（紫外、红外）显微镜； 按机械部件的控制方式分为手动、电动和全自动显微镜。 光学显微镜的种类及结构特征 明视场显微镜即我们通常所说的显微镜，照明光源采用普通灯泡或卤素灯，包括正置显微镜、倒置显微镜、体视镜，主要用于常规组织标本染色，如HE染色和免疫组织化学染色样本的观察。 弱视场包括相差（又称相忖）、霍夫曼、微分干涉和偏光显微镜，照明光源与明视场显微镜通用，只是在光路上插入不同的部件降低背景光的强度，曾强被观察样本的反差，提高对透明样本的观察能力，主要用于活组织未染色样本的观察。 光学显微镜的种类及结构特征 荧光显微镜，照明光源采用汞灯或高能氙灯，通过不同的率光片组合获得不同的激发/发射光，主要用于荧光染色标本的观察。目前由于冷光源技术的开发及荧光蛋白技术的日臻成熟，已逐渐克服了强光源对组织的灼伤及活组织荧光显色等技术瓶颈，使荧光显微技术在活组织样本观察中获得了广泛的应用。 内 容 光学显微镜的种类及结构特征 光学显微镜主要光学部件及性能 与显微摄像有关的基本光学概念 显微摄像系统的基本构成 显微摄像基本操作程序 影响显微成像质量的因素 光学显微镜主要光学部件及性能 透镜及其性能 显微镜成像原理 影响成像的关键因素—相差 主要光学部件及性能 光学显微镜相关参数 透镜及其性能 透镜（lens):透镜是由透明物质（如玻璃等）制成的一种光学元件。 透镜是折射镜，其折射面是两个球面，或一个球面一个平面。它所成的像有实像也有虚像。 透镜一般可以分为两大类：凸透镜和凹透镜。中央部分比边缘部分厚的叫凸透镜，有双凸、平凸、凹凸三种；中央部分比边缘部分薄的叫凹透镜，有双凹、平凹、凸凹三种。 凸透镜具有会聚光线的作用，所以也叫会聚透镜。 凹透镜具有发散光线的作用，所以也叫发散透镜。 透镜是组成显微镜光学系统的最基本的光学元件，物镜、目镜及聚光镜等部件均由单个或多个透镜组成。 虚像/实像：光线通过凹透镜后，成正立虚像，而凸透镜则成正立实像。实像可在屏幕上显现出来，而虚像不能。 焦点与焦平面：?当一束平行于光轴的光线通过凸透镜后相交于一点，这个点称“焦点”；通过交点并垂直光轴的平面，称“焦平面”。焦点有两个，在物方空间的焦点，称“物方焦点”，该处的焦平面，称“物方焦平面”；反之，在像方空间的焦点，称“像方焦点”，该处的焦平面，称“像方焦平面”。 光学显微镜主要光学部件及性能 透镜及其性能 显微镜的成像原理 影响成像的关键因素—相差 主要光学部件及性能 光学显微镜相关参数 显微镜的成像原理 a.当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在像方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实像； b.当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在像方二倍焦距上形成同样大小的倒立实像； c.当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在像方二倍焦距以外形成放大的倒立实像； d.当物体位于透镜物方焦点上时，则像方不能成像； e.当物体位于透镜物方焦点以内时，则像方也无像的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚像。 显微镜的成像原理就是利用上述（c）和（e）的规律把物体放大的。当物体处在物镜前F-2F（F为物方焦距）之间，则在物镜像方的二倍焦距以外形成放大的倒立实像。在显微镜的设计上，将此像落在目镜的一倍焦距F1之内，使物镜所放大的第一次像（中间像），又被目镜再一次放大，最终在目镜的物方（中间像的同侧）、人眼的明视距离（250mm）处形成放大的直立（相对中间像而言）虚像。因此，当我们在镜检时，通过目镜（不另加转换棱镜）看到的像于原物体的像，方向相反。 光学显微镜主要光学部件及性能 透镜及其性能 显微镜的成像原理 影响成像的关键因素—相差 主要光学部件及性能 光学显微镜相关参数 影响成像的关键因素—相差 ?色差（Chromatic?aberration）：?色差是