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第七章 固定化酶、固定化细胞 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 将米氏方程代入 整理：CSTR操作特性方程为： 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 工程上要求，在最短的操作时间内，用最少量的（固定化）酶，达到最大的产物生成量、最高的底物转化率，以使生产成本最低。(这些条件称之为反应器效率。) 下面比较CSTR和PFR的反应器效率： （3）PFR和CSTR反应器的生产时间比较 为了方便比较，把操作方程改写为 ： 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 x应在80﹪以上。 达同样的转化率，F值差别很大。 而且S0/Km越小，差别越显著。 结论：PFR的停留时间小于CSTR的停留时间 同一反应，工艺条件相同，转化率相同，PFR 和 CSTR所需的时间不同。转化率越高，两者差距越大。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 （4）PFR和CSTR反应器的用酶量比较 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 反应器体积一定，达到相同转化率时， ECSTR/EPFR 与转化率的比较 转化率x愈高， Km/S0 越大，用酶量的差别越大。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 在给定的反应体系下，反应器中的装酶量为定值，达一定x下反应器所需酶量愈少；反应器的反应有效容积也就愈大。可见PFR的生产能力比CSTR的大。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 第五节 固定化酶、细胞反应器及动力学 1.固定化酶、细胞反应器 反应器的类型和特点 (1)间歇式搅拌罐反应器 用于游离酶反应后随即放料。 (2)连续流动搅拌罐反应器 连续进料、连续出料 (3)填充床反应器 固定化酶填充于床层内。反应器内的流体的流动形态为活塞流形。底物以恒定流速通过反应床。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 (4)流化床反应器 底物以足够大的流速向上通过固定化酶床层，使固体颗粒处于流化状态。 (5)循环反应器 部分反应液流出和新加入底物流入液混合，在进入反应床进行循环。 (6)连续流动搅拌罐-超滤膜反应器 由连续流动搅拌罐反应器和超滤装置组合而成。在连续流动搅拌罐的出口处装有半透膜。 (7)其它反应器 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 人工肾： 原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 酶传感器 固定化酶和电化学传感器的结合。 优点： ①既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度； ②酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定。 1967年Updike等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器葡萄糖氧化酶电极。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 酶电极示意图 ?-D-葡萄糖＋O2→D-葡萄糖酸-1,5-内酯＋H2O2 半透膜 酶胶层 感应电极 根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 生物识别元件是酶、抗原(体)、细胞器、组织切片和微生物细胞等生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。 生物传感器(酶传感器)原理 由生物识别单元（如酶、微生物、抗体等）和物理转换器相结合所构成的分析仪器。 换能器将识别元件上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为电信号，并呈现一定的比例关系。 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 酶传感器工作原理示意图 酶传感器主要由固定化酶膜和变换器组成： 固定化酶膜：选择性地“识别”并催化被检测物质发生化学反应； 变换器：把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，通过仪表显示出来。? 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 第三节 固定化酶、细胞反应动力学 影响固定化酶反应动力学的因素可归纳下列几个方面： 酶活性与酶分子的三维空间结构有关。酶分子被固定时，其构象将发生改变，酶活性部位的三维结构可能改变，从而改变酶的活性。 1、酶分子构相的改变和载体屏障效应 生物工程专业课程 生化工程 第七章 固定化酶 固定化细胞 1.