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冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 作者：屈红丽nbsp; 可钰nbsp; 尹鹏nbsp; 刘宏民 【关键词】nbsp; 冬凌草；,,总黄酮；,,正交实验 　　摘要：目的研究冬凌草中总黄酮的提取工艺并测定总黄酮的含量。方法采用正交实验进行提取工艺的优选。紫外分光光度法测定总黄酮的含量。结果采用最佳提取工艺测定了不同部位不同产地的冬凌草中总黄酮含量，花中总黄酮含量最高，不同产地含量差别比较大。结论该方法简单、可靠、稳定、重现性好。 　　关键词：冬凌草；nbsp; 总黄酮；nbsp; 正交实验 　　Extracting Technology and Determination of the Total Flavonoid of Rabdosia rubescens (Hemsl.)Hara 　　Key words：Rabdosia rubescens(Hemsl.) Hara;nbsp;nbsp; Total flavonoid;nbsp;nbsp; Orthogonal experiment nbsp;nbsp;nbsp; 　　冬凌草Rabdosia rubescens (Hemsl.)Hara，又名冰凌草，为唇形科香茶菜属多年生草本植物，以地上部分入药。广泛分布于黄河流域及其以南广大地区，主产于河南太行山区。味甘苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤之功效［1］。孙汉董课题组［2］从20世纪70年代开始研究冬凌草，从中分出了二萜、三萜及少量黄酮。Han J［3］等用 LCESIMSMS方法对冬凌草中的五个二萜类及五个黄酮类化合物同时进行了含量测定。我们课题组在研究冬凌草化学成分的同时，发现其中黄酮类化合物含量较高。紫外分光光度法可用于黄酮［4~5］等含量测定。本文对济源产冬凌草中的黄酮类化合物进行了提取工艺研究,并对不同部位不同产地的冬凌草中的总黄酮进行了含量测定。 　　1nbsp; 仪器与材料 　　1.1nbsp; 仪器Jasco V550紫外/可见分光光度计；KQ5200DB型数控超声波洗涤器。 　　1.2nbsp; 材料冬凌草，采自济源市王屋山，经河南中医学院药学院陈随请教授鉴定为Rabdosia rubescens(Hemsl.) Hara的地上部分。芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所。所用试剂均为分析纯。 　　2nbsp; 方法与结果 　　2.1nbsp; 对照品溶液的制备 精密称取在120 ℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品 60.9 mg于100 ml容量对照品溶液的制备瓶中，加适量90%乙醇温热溶解，放冷，用90 %乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液12.50 ml置于50 ml容量瓶中，90 %乙醇稀释至刻度，摇匀。 　　2.2nbsp; 测定波长的确定 取对照品溶液，按 2.3 项下方法操作［6］，在300～700 nm范围内测定吸收度值，结果表明芦丁在 504 nm处有最大吸收。 　　2.3nbsp; 标准曲线的绘制精密量取上述对照品溶液0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 ml置于10 ml容量瓶中，分别加 90%乙醇至5 ml，加 5%亚硝酸钠溶液0.4 ml，混匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液 0.4 ml，混匀，放置6 min，加4% NaOH溶液4 ml，再加 90%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min。以第1管为空白，在504 nm波长处测定吸收度A，以测定吸收度（A）对溶液浓度（C）进行回归，得线性方程y=0.001 3x+0.011 7，相关系数r=0.999 2。可见，在测定浓度范围0.152~0.533 mg/ml内线性关系良好。 　　2.4nbsp; 精密度考察 精密量取同一供试品溶液1 ml，按“2.6.2”项下方法操作重复进行7次。结果见表1。RSD为 0.082%，表明本方法精密度良好。 　　表1nbsp; 精密度实验结果（略） 　　2.5nbsp; 稳定性考察 取同一供试品溶液，依法显色，自加完显色剂开始，每隔10 min测定吸收度1次，RSD为 0.69%，表明供试品溶液在 80 min内测定基本稳定。 　　2.6nbsp; 供试品溶液的制备 　　表 2nbsp; 稳定性考察结果（略） 　　2.6.1nbsp; 提取条件的正交实验 将干燥冬凌草叶粉碎，分别精密称取2 g粗粉9份，选择乙醇浓度、乙醇用量、超声时间、温度等 4 个因素，每个因素选择 3 个水平，编制因素水平表。按 L9(34)正交设计方案［7］，乙醇浸泡1