礦山酸性水微生物研究方向论文之一.docVIP

合肥学院学士学位论文 0408级生物工程专业毕业论文级生物技术专业毕业论文 PAGE 28 PAGE 24 1. 绪 论 1.1矿山酸性污水的介绍 酸性矿井水AMD（acidmine drainage） 是由煤层和围岩中含有的硫化物（主要是黄铁矿 FeS） ,在化学氧化剂 （O 2, Fe3+）[1]和氧化亚铁硫杆菌（Thiobacillus ferrooxidans,简称 T. f菌）[2]作用下,发生氧化反应而形成的[3]。AMD的 pH通常很低，严重的地方可达 pH2.0 ,富含SO42-离子和 Fe3+ 离子,易浸出废矿石中的有毒元素 ,如铅、砷、铬、铜等以及氰化物[4] ,对矿业生产、生态环境造成严重危害 ,因而近几十年来 ,关于酸性矿井水的研究一直受到人们的关注。一般认为酸性矿井水的形成是氧化亚铁硫杆菌、Fe3 +和O 2共同作用的结果 ,其中 T. f菌起着决定性的作用。只有在分子水平上研究该菌种，才能对它的机理进行全面的了解。所以我们就以在分子学水平上研究嗜酸菌的DNA，进而对嗜酸菌的特性进行研究。 1.2嗜酸菌的研究概况 1.2.1嗜酸菌的生理特性 氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillusfe rrooxidans):是生物湿法冶金过程主要的浸矿菌种。这种菌系短杆菌，很小，0.3-0.5x1.0-2.0um，圆钝末端，以单个、双个或几个成短链状存在。是一种化能自养菌，专性好氧，嗜酸性，广泛生活在金属硫化矿和煤矿的酸性矿坑水中。最适生长温度25-30℃。生长在pH1.4-6.0之间，最适pH2.0-2.5。T.f以氧化亚铁、元素硫以及还原态的硫化合物等来获得生命过程所需的能量，以空气中的二氧化碳为碳源，以氨或铵盐为氮源。有鞭毛，能快速游动，革兰氏染色阴性。在9K固体培养基上呈红棕色菌落，近杆形[5] Schrenket [6]用DNA印迹技术和 SSUrRNA序列荧光分子杂交技术分析了氧化亚铁硫杆菌的分布和丰度 ,认为该菌不生长在矿体区 ,而是生长于较近的温度更低( 30 ℃)的 pH更高( 1.3)的区域 ,是一种机会菌。其生长周期为 6～10d,菌落为黑色 ,直径为 0.5 mm,菌落周围为分散的铁锈色的斑渍区域 ,细菌和菌落形态分别见图1－1 图1-1　电镜观察氧化亚铁硫杆菌的细胞图 图1-2 电镜观察氧化亚铁硫杆菌的细胞图 　 氧化硫硫杆菌(Thiobacillusth iooxidans,T.t)由Waksman和Joffe[7]首先分离得到。短杆菌，0.5x1.0-2um，单生、对生或成短链。以硫单质、无机硫化物为能源，因能迅速氧化硫单质而著称。生长温度2-40℃，最适温度25-35℃生长pH0.5-6.0，最适pH2.0-3.5。在硫代硫酸盐固体培养基上的菌落极小(一般小l.0mm)，透明或白黄色，在延长培养时变清亮，边缘完整;在液体培养基中均一浑浊，含硫培养液pH1。革兰氏阴性，严格好氧，是专性自养极端嗜酸性的化能无机营养菌，广泛分布硫化矿床和酸性矿水及土壤中，在细菌浸矿等多方面都有应用价值，但生长缓慢，对重金属如砷、汞、银等缺乏抗性 1.2.2嗜酸菌的氧化机理 自二十世纪六十年代以来，因为它们具有特殊的生物学功能，吸引了许多学者对T.f和T.t的生理特性进行了研究。许多研究表明，T.t利用单质硫的能力比T.f强，但T.t不能利用硫酸亚铁。Wong和Henry[9]对氧化硫酸亚铁的机理进行了详细的研究，指出能将亚铁氧化成三价铁，三价铁会与硫酸根离子发生反应产生铁矾沉淀，同时产生硫酸而引起pH的下降: 4FeSO4+ 02+2H2SO4 → 2Fe2(SO4)3+2H2O (1-1) 6Fe3++4SO42-+12H2O → 2HFe3(SO4)2(OH)6+10H+ (1-2) Templellvl [10]和Leathen[11]等人研究发现氧化亚铁硫杆菌能将矿物中的硫化矿物氧化为硫酸和硫酸盐。Bryne [12]等对T.f氧化硫化矿物的机制进行了详细的研究。并提出了一些常见矿物的主要反应机理，如黄铁矿和黄铜矿: 2FeS2+ 702+2H20→2FeSO4+2H2 SO4 (1-3) 4FeSO4+ 02+2H2SO4→2Fe2(SO4)3+2H20(1-4) [13] Cu FeS2+402→Cu S04+FeSO4(1-5)[14] 2Cu2S+02+2H2 SO4→2CuS+2CuSO4+2H20(1-6) CuS+202→Cu S04(1-7) 1.3.微生物分子生态学研究的一般方法和原理 微生物分子生态学是分子生态学的重