第三苷类化合物.pptVIP

二．色谱检识 1． 薄层色谱（分配原理） 硅胶正相色谱 硅胶反相色谱 固定相 硅胶表面吸附的水 Rp-18、 Rp-8 展开剂 正丁醇-乙酸-水（4：1：5 ，上层） 氯仿-甲醇 氯仿-甲醇-水（65：35：10，下层） 甲醇-水 （三元系统） （二元系统） 适用范围 大多数苷（极性偏大） 极性较小的苷 固定相 水 展开剂 正丁醇-乙酸-水（4：5：1，上层） 正丁醇-乙醇-水（4：2：1） 水饱和的苯酚 显色剂 苯胺-邻苯二甲酸试剂，间苯二酚-盐酸试剂（薄层、纸层均可） 茴香醛-硫酸、间苯二酚-硫酸、ａ-萘酚-硫酸（仅薄层适宜） （主要针对苷中糖及糖的显色，针对苷元的显色见各章节） 2．纸色谱（分配原理） 六、 苷类的结构研究 苷类结构研究的一般程序： 1.物理常数的测定。Mp. [ａ]等。 2.分子式的测定——质谱分析法（广泛采用） 电子轰击质谱（EI-MS）：不易获得分子离子峰（极性大） 化学电离质谱（CI-MS） 场解吸质谱（FD-MS）：常用 快原子轰击质谱（FAB-MS）：常用 高分辨快原子轰击质谱（HR-FAB-MS）：能直接测出分子式 3.组成苷的苷元、糖的鉴定 （1）苷元的结构鉴定（见各章节） （2）糖的种类鉴定 纸色谱（PC）：分配原理，BAW系统，与对照品共色谱鉴定 薄层色谱（TLC）：硅胶（硼酸溶液或无机盐溶液制 - 增加上样量） 气相色谱（GLC）：水解、制备TMS衍生物（具挥发性），用对照品tR鉴定 超导FT-NMR光谱: 苷中各糖的不同质子的δ、J 与标准糖数据进行比较鉴定 苷中各糖的不同碳原子的δ 与标准糖数据进行比较鉴定 （3）糖的数目的测定 ●光密度扫描法测定各糖斑点含量，计算各糖分子比，推算组成苷的糖的数目 ●质谱法测定苷及苷元的分子离子峰（分子量），计算其差值，求出糖的数目 ● 1H-NMR谱: 端基质子的信号（δ大 - 处于低场）数目 ●全乙酰化或全甲基化物乙酰氧基、甲氧基信号（δ、J）的数目 ● 13C-NMR谱: 端基碳原子信号（δ90～112ppm）的数目 ●苷分子总碳信号数目减去苷元的碳信号数目,推算糖的数目 4、苷元与糖、糖与糖之间连接位置的测定 （1）苷元与糖之间连接位置的测定 13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与苷元的碳谱相比较即可鉴别 醇羟基苷化，苷元ａ-碳向低场位移（δ+4～10ppm），β-碳向高场位移（-0.9～-4.6ppm） 酚羟基苷化,苷元ａ-碳向高场位移 ，β-碳向低场位移 化学方法: 将苷的全甲基化物进行甲醇解，鉴定（与对照品共色谱）未全甲醚化的单糖，游离羟基所在位置即糖与糖之间的连接位置。 13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与相应单糖的碳谱数据相比较即可鉴别 。 糖与糖相连，内侧糖连接糖的碳原子移向低场 （δ4～7 ppm） 相邻碳原子移向高场（δ -1～-4 ppm） （2）糖与糖之间连接位置的测定 5、糖与糖之间连接顺序的确定 苷 缓和酸水解、酶解 乙酰解 全甲基化甲醇解 部分苷键断裂 的裂解产物 推 断 分 析 波谱分析法 质谱（MS）法 :主要利用质谱中归属于有关糖基的碎片离子峰或各种分子离子脱糖基的碎片离子峰，可对糖的连接顺序作出判断。 EI-MS (需作成全甲基化、乙酰化或三甲基硅醚化物) 常见各单糖及双糖的全乙酰化物、TMS衍生物碎片离子峰见书。 FD-MS 或FAB-MS：常出现各种脱去不同程度糖基的 碎片离子峰。 核磁共振（NMR）法：13C-NMR谱碳原子的自旋-弛豫时间（T1）的大小推断。 NT1 随糖链距离的增加而增大 6、苷键构型的确定 （1）利用酶水解法——(酶的专属性) （2）利用开勒（Klyne）经验公式进行计算 Δ[M]D = [M] D苷-[M] D苷元 与各糖的一对甲苷（ａ-、β-）的分子比旋度相比较， 与ａ-甲苷接近，则该苷键构型为ａ-构型 与β-甲苷接近，则该苷键构型为β-构型 （3）利用核磁共振（NMR）确定苷键构型 13C-NMR谱： 利用端基碳原子的化学位移判断苷键