A12大豆脲酶的提取及其活性测定例析.pptVIP

济南大学山东省医学科学院 成员：许玉灿 李乐凯 赵 华 --大豆脲酶的提取及其活性测定 Page ? * 目录 实验背景 1 2 3 实验目的与原理 实验步骤 实验结果与分析 4 Page ? * 脲酶（Uease）又称尿素酶,主要来源于豆类植物，能将特异性的将尿素分解为氨和二氧化碳，大豆脲酶主要用来检测尿和血液中的尿素。 目前我国脲酶多依赖进口，且生产工艺多采用丙酮来提纯，生产操作复杂、危险性大。 大豆脲酶 1.实验背景 Page ? * 1、本实验针对脲酶的生产工艺进行改进，用乙醇代替丙酮，操作简便、安全无毒且生产成本大大降低。 2、测定脲酶粗品的活性，获得较高活性的脲酶，为后续获得更高活性的脲酶打下基础。 2.实验目的与原理 实验目的 2.１ Page ? * 1、利用蛋白质易溶于有机溶剂的原理进次浸提，利用盐析进行脲酶多级提纯。 2、利用考马斯亮蓝法测定样品中蛋白含量，用SDS电泳法测定脲酶纯度。 3、利用脲酶催化尿素水解产生氨，过量盐酸中和所产生的氨，之后用氢氧化钠滴定，测定脲酶活性。 2.实验目的与原理 实验原理 2.2 Page ? * X＝14×c（Vo－V）÷30m ＝14×0.1×（20.2－13.5）÷（30×0.5） 式中： X一试样的脲酶活性，单位为比活性单位(U/mg）； c一氢氧化钠标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)； Vo一空白消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)； V一试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL)； 14一氮的摩尔质量，M(N2）＝14g/mol； 30一反应时间，单位为分钟(min)； m一试样蛋白质量，单位为克或毫克(mg）； 2.实验目的与原理 实验原理 2.2 Page ? * 3.实验步骤 大豆制粉 30％乙醇两次浸提 硫酸铵多级盐析提纯 利用脲酶分解脲素为氨的特性检测大豆脲酶的活性 抽滤，40℃烘干得到样品 SDS检测样品纯度 考马斯亮蓝法测蛋白质含量 4.实验结果与分析 样品中蛋白质含量检测 4.1 4.实验结果与分析 理论大小50kDa左右 大豆脲酶SDS检测 4.2 M 1 2 3 4 60 45 27 14.4 6.2 kDa M：Maker； 1：标准品； 2：粗酶液； 3：粗酶液稀释10倍； 4：粗酶液稀释5倍