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1 2 3 升华与凝华 谢谢您！ 数学组4号 温度对黑线仓鼠氧化应激、抗氧化水平和解偶联蛋白表达的影响 答辩人：周思思 导 师：赵志军 2016年5月7日 目录页 contents 一、背景介绍 二、实验材料 三、实验方法与结果 四、实验结论 五、致谢 一、背景介绍 自由基理论认为细胞的代谢过程离不开氧的存在，生物氧化的过程是细胞获得能量的过程。自由基理论把衰老与代谢联系起来，并认为活性氧（ROS）水平是最主要的因素。因为高ROS水平会增强氧化来损伤生物大分子如蛋白质、脂质及DNA，因此高ROS水平被认为是减少预期寿命的原因。对于代谢率与ROS产生的关系，在一些研究中发现这两者之间是存在着明显的负相关，对其的一个可能的解释是“解偶联求生存”假说。 选题 意义 当下最为紧迫的任务是研究代谢率与活性氧（ROS）产生之间的关系是不是呈负相关，并用实验来证明“解偶联求生存”假说的现实意义。 二、实验动物 来源：本实验所使用的黑线仓鼠来自于河北省的农田 ，黑线仓鼠被单独安置在装有适量锯末的塑料笼子里(29 × 15 × 18 cm)，定期更换干净的锯末并且清理笼子；保证黑线仓鼠有充足的食物和水。实验前所有动物都安置在21±1°C温度的环境中。 分组：成年仓鼠3.5 到4.5个月的年龄，随机分成3组，低温驯化组5±1°C (n = 9)和温暖气温驯化组32.5±1°C (n = 8)，对照组保存在室温下(21±1°C)(n = 8)，分别饲养6周。所有动物的体重和食物摄入量是每两天测量一次并且及时记录数据。温度处理结束后，对各个组的组织样品进行收集与保存。 三、实验方法与结果 3.2 总能量摄入(GEI)，消化能量摄入(DEI)和消化率 3.3 氧化应激标记物和抗氧化酶 3.4总抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性 3.5 UCP mRNA的表达 3.1 体重与食物摄入量 3.1 体重与食物摄入 在不同温度（5°C，21°C，32.5°C）驯化下黑线仓鼠的体重变化（A）和食物摄入量(B)。数据平均值± SE, **P0.01。 结果表明：3个小组的黑线仓鼠的体重没有发生明显的变化，但与对照组相比在5°C环境中驯化的黑线仓鼠的代谢率增加，在32.5°C环境中驯化的则反之。 3.2总能量摄入(GEI)，消化能量摄入(DEI)和消化率 实验结果：总能量摄入(GEI)，消化能量摄入(DEI)和消化率计算使用以下方程: 总能量摄入(kJ/d) = [食物摄入量(g/d) ×饲料的干物质含量(%) –食物碎屑] ×食物总能量含量(kJ/g)； 消化能量摄入(kJ/d) =总能量摄入– [粪便干质量(g/d) ×粪便的总能量含量(kJ/g)]； 消化率 (%) =消化能量摄入/总能量摄入× 100% 温度对黑线仓鼠总能量摄入（GEI，A），粪便的总能量（GE）（B），消化能量摄入（DEI，C）和消化率（D）的影响。数据平均值± SE, **P0.01 结果表明：相对于对照组在5°C环境中驯化的黑线仓鼠其总能量摄入增加，而在32.5°C环境中则减少；在5°C环境中驯化的黑线仓鼠其消化能量摄入提高了68.9%，而在32.5°C环境中则降低了37.2%。然而3个小组之间的消化率并没有明显的差别。 3.3 氧化应激标记物和抗氧化酶 （1）蛋白质浓度的测定 用Lowry法测定蛋白质浓度（本法用于微量蛋白质的含量测定。蛋白质在碱性溶液中可形成铜—蛋白质复合物，此复合物加入酚试剂后，产生蓝色化合物，该蓝色化合物在650nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，根据样品的吸光度，计算蛋白质含量。） 结果表明：在5°C环境中驯化的黑线仓鼠的褐色脂肪组织（BAT）蛋白质含量明显高于对照组以及在32.5°C环境中驯化的黑线仓鼠。肝脏、心脏、肌肉以及大脑中的蛋白质含量都不受温度的影响。 3.3 氧化应激标记物和抗氧化酶 （2）氧化应激 使用(南京建成生物工程研究所)生产的试剂测定过氧化氢（H2O2）水平，并通过对过氧化氢水平的测定来分析分析黑线仓鼠的氧化应激水平。过氧化氢（405nm）的水平表示为毫摩尔/克蛋白质（mmol/g protein）。 丙二醛(MDA)作为脂质过氧化反应的指标。MDA是脂质过氧化反应的最终产物，用硫代巴比妥酸（TBA）在532nm波长进行测定，并且产生具有粉红色的产物。组织MDA水平表示为纳摩尔/克蛋白质（nmol/mg protein）。 温度对H2O2（A）和黑仓鼠丙二醛（MDA）含量（B）的影响。数据平均值±S,E** P 0.01。 结果表明：在各组织中过氧化氢（H2O2）的水平几乎没有受温度的影响。在褐色脂肪组织（BAT）中温度对于丙二醛(MDA)水平的表达有明显的影响；相对于对照组在5°C环境中