实验5：大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒DNA转化报告.pptVIP

实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒DNA转化 实验目的和要求 学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞； 学习用热激法将外源基因导入感受态细胞。 实验原理 实验材料 实验步骤 预期结果 注意事项 一、实验原理（CaCl2法、热激法） 1、几个概念 转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，如DH1、DH5、MM294、JM108/109、DH5α等， 常用 RM 符号表示。 转化方法：电击法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法 感受态细胞(competent cell) ：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。 转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。 2、CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 正在生长的大肠杆菌在0℃下加入到低渗的冰冷的氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀形成原生质球，并同加入在转化混合物中的外源质粒DNA或λ噬菌体DNA形成一种黏着在细胞表面上的对DNase抗性的羟基钙磷酸复合物。转移到42℃下作短暂的热刺激期间，这种复合物便会被细胞吸收。 抗Am