01.蛋白质化学幻灯片.pptVIP

1、透析、超滤 根据性质：分子大小 2、盐析（salting out） 根据性质：蛋白质的沉淀 作用机理：中性盐中和表面电荷，破坏水化层 影响因素：表面电荷、水化层、溶剂性质 小结 3、电泳： 根据性质：蛋白质的两性解离 作用机理：异性电荷互相吸引 影响因素：电荷种类及数量、分子大小及形状、溶液离子强度及pH等 4、层析 （1）离子交换层析：电荷、分子量、分子形状 （2）亲和层析：生物特性 （3）吸附层析：吸附特性 （4）分子筛（凝胶过滤层析）：分子大小及形状 大分子先洗脱下来 5、超速离心：分子大小及形状、溶液特性 重要内容： 1、重要名词：等电点；亚基；别构效应; 蛋白质变性与复性; 分子病 2、结构层次 元素组成：C、H、O、N（16%）、S 结构单位：20种L-α氨基酸（芳香族、含硫、酸性、碱性氨基酸等） 一级结构：肽键；多肽链；N端?C端 二级结构：稳定力（氢键）；类型（?螺旋，?折叠，?转角，无规卷曲） 三级结构特点 四级结构特点 3、重要性质：两性解离及带电状态判定；紫外吸收；沉淀；变性 4、分离纯化：超滤；盐析；电泳；亲和层析；离子交换层析；分子筛 5、结构与功能关系（举例） 1、一级结构中的保守序列决定空间结构 （1）不同蛋白质之间的比较：相似结构相似功能、不同结构不同功能 （2）同一蛋白质不同状态的比较：一级结构决定空间结构 【经典举例】蛋白变性与复性 （3）保守序列、保守氨基酸改变，功能改变；保守氨基酸不变，功能不变 【经典举例】分子病 小结 2、一级结构并非影响空间结构的唯一因素 分子伴娘(molecular chaperons，分子伴侣)：在蛋白质加工、折叠形成特定空间构象及穿膜进入细胞器的转位过程中起关键作用的一类蛋白质。 与未折叠的肽段（疏水部分）进行可逆的结合，辅助二硫键的正确形成； 引导肽链的正确折叠并集合多条肽链成为较大的结构； 可以解聚错误聚合的肽段，防止错误发生。 肌红蛋白与血红蛋白的结构 二、空间结构与功能的关系 空间结构体现生物活性：结构相似，功能相似 肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 空间结构体现生物活性：结构改变，功能改变 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应(cooperativity) 。 正协同效应(positive cooperativity)：促进作用 负协同效应(negative cooperativity)：抑制作用 别构效应（变位效应，allosteric effect）：蛋白质分子的特定部位与小分子化合物结合后，引起空间构象改变，从而促使生物学活性变化的现象。 疯牛病中的蛋白质构象改变 疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。 正常的PrP富含α-螺旋，称为PrPc。 PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为β-折叠的PrPsc，从而致病。 PrPc α-螺旋 PrPsc β-折叠 正常 疯牛病 朊病毒致病过程中的构象变化示意图 1、空间结构体现生物特异性 2、空间结构体现生物活性 3、空间结构的灵活性，体现了生物活性的可调节特性 空间结构中的特定区域体现生物活性 小结 别构效应（别位效应、变位效应，allosteric effect）：蛋白质分子的特定部位（调节部位）与小分子化合物（效应物）结合后，引起空间构象发生改变，从而促使生物学活性变化的现象称为变构效应。包括正协同、负协同效应 【经典举例】血红蛋白（Hb）：由α2β2四聚体组成，每个亚基含有1个血红素辅基；Hb的氧解离曲线呈“S”型。 多种空间构象，多种活性状态 4、空间构象并非生物活性的唯一影响因素 【举例】低温下酶活性低，但并不影响构象；盐析时沉淀的酶无活性，但构象不变。 5、蛋白构象疾病：错误构象相互聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病。 老年痴呆 疯牛病 亨汀顿舞蹈病 第五节 蛋白质的理化性质及分离纯化 1、蛋白质的两性电离 一、理化性质 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 * 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。 2、蛋白质的紫外吸收 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈